彭州地區(qū)部分牡丹品種的AFLP研究.pdf

1、牡丹為異花授粉植物，自交結(jié)實(shí)率很低，這一特性為人工選擇和自然選擇提供了豐富的變異來源。經(jīng)過長期的馴化栽培，不僅形成了類型多樣的品種，而且品種間的親緣關(guān)系也較為復(fù)雜。因此在遺傳上進(jìn)行分類鑒定和親緣關(guān)系的探討不僅對(duì)揭示物種的演化有重要意義，而且有利于指導(dǎo)牡丹新品種選育及傳統(tǒng)品種的保護(hù)等工作。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用AFLP(Amplified Fragment Length PolymorpHism)技術(shù)對(duì)28個(gè)牡丹品種進(jìn)行分子水平的親緣

2、關(guān)系及遺傳多樣性研究。首先采用改良的CTAB法從牡丹幼葉中提取到了高質(zhì)量的基因組DNA，用于AFLP的雙酶切，酶切完全；然后對(duì)牡丹AFLP選擇性擴(kuò)增體系進(jìn)行優(yōu)化，建立最佳反應(yīng)體系，篩選出適合牡丹AFLP分析的引物組合進(jìn)行擴(kuò)增。最后，對(duì)樣品的AFLP圖譜及數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果如下：
　　 1.本實(shí)驗(yàn)采用改良的CTAB法從牡丹幼葉中提取基因組DNA，產(chǎn)率很高，OD260/OD280為1.8～2.0之間；經(jīng)過去RNA處理后，用瓊脂糖

3、凝膠電泳檢測(cè)，主帶清晰、DNA純度高、沒有降解、不含酶反應(yīng)抑制劑，可被MseI和EcoRI兩種限制性內(nèi)切酶完全消化。
　　 2.對(duì)牡丹酶切及選擇性擴(kuò)增體系進(jìn)行優(yōu)化，獲得了最佳反應(yīng)體系，酶切時(shí)最適溫度為37℃，限制性內(nèi)切酶用量為3U，酶切時(shí)間為3h;選擇性擴(kuò)增最優(yōu)體系為：預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物2μl，E-primer0.5μ1，M-primer0.5μl，Taq酶0.25μl，MgCl21.2μl, dNTPs1.6μl,10×Buffer2

4、μl, ddH2O11.95μl。
　　 3.采用優(yōu)化后體系，對(duì)64對(duì)AFLP引物組合進(jìn)行篩選，經(jīng)過3次重復(fù)，篩選出了6對(duì)擴(kuò)增條帶多、多態(tài)性高的引物組合。
　　 4.利用篩選出的6對(duì)選擇性擴(kuò)增引物組合，對(duì)28個(gè)牡丹品種進(jìn)行了AFLP研究。6對(duì)引物共擴(kuò)增出譜帶2562條（100～750bp之間），其中2142條具有多態(tài)性，占83.61％。多態(tài)性譜帶最多的組合為E-AAC/M-CTA(88.19％)，最低的為E-AAC/M-