腸道益生菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦非特異性免疫功能和抗病力影響的研究.pdf

1、本論文通過(guò)養(yǎng)殖試驗(yàn)和WSSV攻毒實(shí)驗(yàn)分析了5株對(duì)蝦腸道益生菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦非特異性免疫功能和抗病力的影響。研究分為4部分： 第一部分是在基礎(chǔ)飼料中分別添加0.1％美人魚發(fā)光桿菌滅活菌、1％美人魚發(fā)光桿菌滅活菌和0.1％美人魚發(fā)光桿菌活菌配制成三種免疫實(shí)驗(yàn)飼料，以基礎(chǔ)飼料為空白對(duì)照組飼料，每處理設(shè)3個(gè)平行樣。對(duì)體質(zhì)量為（4.83±0.36）g的凡納濱對(duì)蝦進(jìn)行為期20天的飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，分別在0、5、10、15和20d進(jìn)行取樣，以血清中的酚

2、氧化酶活性（PO）、酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、超氧化物歧化酶（SOD）和溶菌酶活性（UL）為免疫指標(biāo)，探討了美人魚發(fā)光桿菌作為免疫制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦非特異性免疫效應(yīng)的影響；并在投喂免疫飼料后的第22d，按4.2g.kg-1體重的劑量，直接投喂對(duì)蝦白斑綜合征病毒（WhiteSpotSyndromeVirus，WSSV）病料，記錄WSSV感染14d內(nèi)凡納濱對(duì)蝦的累積死亡率。結(jié)果表明，美人魚發(fā)光桿菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦血清中PO、AC

3、P、AKP、UL、SOD等活性有顯著或極顯著的影響（P<0.05或P<0.01），明顯提高了對(duì)蝦抵御WSSV感染的能力，其中0.1％美人魚發(fā)光桿菌活菌實(shí)驗(yàn)組的抗病毒感染能力最強(qiáng)，WSSV感染14d內(nèi)累計(jì)死亡率為63.3％±5.8％，而對(duì)照組為96.7％±7.3％。實(shí)驗(yàn)表明，在適宜范圍內(nèi)，美人魚發(fā)光桿菌在一定程度上能提高凡納濱對(duì)蝦非特異性免疫水平和增強(qiáng)抵抗疾病的能力，其作為對(duì)蝦免疫增強(qiáng)劑具有良好的應(yīng)用前景。 第二部分是在B組基礎(chǔ)飼

4、料中分別添加了0.1％和1％大黃魚弧菌滅活菌制劑和0.1％活菌配制成三種免疫實(shí)驗(yàn)飼料；C組基礎(chǔ)飼料中分別添加了0.1％和1％鞘氨醇單胞菌滅活菌制劑和0.1％活菌配制成三種免疫實(shí)驗(yàn)飼料；以基礎(chǔ)飼料為空白對(duì)照組飼料，每處理設(shè)3個(gè)平行樣。對(duì)凡納濱對(duì)蝦體長(zhǎng)（11.00±1.18）cm，體質(zhì)量（12.12±0.36）g，進(jìn)行為期20天的飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，分別在0、5、10、15和20d進(jìn)行取樣，以血清中的酚氧化酶活性（PO）、酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷

5、酸酶（AKP）、超氧化物歧化酶（SOD）和溶菌酶活性（UL）為免疫指標(biāo)；并在投喂免疫飼料后的第22d，按4.2g.kg-1體重的劑量，直接投喂對(duì)蝦白斑綜合征病毒（WhiteSpotSyndromeVirus，WSSV）病料，記錄WSSV感染14d內(nèi)凡納濱對(duì)蝦的累積死亡率。結(jié)果表明，除了個(gè)別情況外，大黃魚弧菌和鞘氨醇單胞菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦血清中PO、ACP、AKP、UL、SOD等活性有顯著或極顯著的影響（P<0.05），并且在飼料中兩種益生菌

6、后后，明顯提高了對(duì)蝦抵御WSSV感染的能力，其中兩種益生菌的0.1％活菌實(shí)驗(yàn)組的抗病毒感染能力較強(qiáng)，WSSV感染14d內(nèi)累計(jì)死亡率分別為21.67％、45.00％，均顯著低于對(duì)照組（66.67％）的累積死亡率。 第三部分將兩株益生菌PC070573和LV060810分別添加在基礎(chǔ)飼料中，以0.1％和1％滅活菌及0.1％活菌添加配制成三種免疫飼料試驗(yàn)組，并以基礎(chǔ)飼料為空白對(duì)照組，每處理設(shè)3個(gè)平行樣。對(duì)體質(zhì)量為（4.83±0.36）

7、g的凡納濱對(duì)蝦進(jìn)行為期3周天的飼養(yǎng)試驗(yàn)和兩周的WSSV攻毒試驗(yàn)，每5d取樣1次，檢測(cè)凡納濱對(duì)蝦血清的溶菌酶、酚氧化酶、酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、超氧化物歧化酶，探討兩株益生菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦非特異性免疫的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：PC070573的三個(gè)免疫組中1％滅活菌組的各項(xiàng)免疫指標(biāo)較高，LV060810的三個(gè)免疫組中0.1％活菌組的各項(xiàng)免疫指標(biāo)較高；但免疫保護(hù)率前者遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于后者。 第四部分是在凡納濱對(duì)蝦的基礎(chǔ)飼料中添加了0.1％和1％大黃魚

8、弧菌滅活菌制劑和0.1％活菌配制成三種免疫飼料試驗(yàn)組，并以基礎(chǔ)飼料為空白對(duì)照組，每處理設(shè)3個(gè)平行樣。對(duì)凡納濱對(duì)蝦進(jìn)行為期20天的飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，分別在0、5、10、15和20d進(jìn)行取樣，以血清中先天免疫相關(guān)基因（Toll受體和熱休克蛋白）為免疫指標(biāo)，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和熒光定量PCR的方法，進(jìn)行基因的mRNA表達(dá)檢測(cè)，并以β-actin為內(nèi)參照進(jìn)行基因表達(dá)水平的定量分析。結(jié)果顯示，三個(gè)試驗(yàn)組中0.1％活菌制劑組的凡納濱對(duì)蝦