奶牛新孢子蟲病分子生物學檢測方法的研究.pdf

1、目的：新孢子蟲?。∟eosporosis）是由犬新孢子蟲（Neospora caninum）寄生在宿主體內所引起的一種多種動物共患的血液原蟲病。該病不僅對狗等動物造成危害，對牛的危害尤為嚴重，現(xiàn)已確證，它是世界上許多地區(qū)造成奶牛流產、產弱胎、死胎和木乃伊胎的主要原因之一。目前，還沒有能夠預防治療新孢子蟲病的有效藥物和疫苗，故對該病的早期檢測是有效防控該病的重要手段。
　　方法：本研究根據(jù)GenBank上發(fā)表的牛新孢子蟲NcSAG1

2、基因、Nc5基因、NcSRS2基因和牛性腺（prolactin）基因設計四對特異性引物，以NcSAG1基因、Nc5基因和NcSRS2基因作為目的基因對牛新孢子蟲進行檢測，以牛性腺基因擴增的片段作為內標對反應過程進行監(jiān)測，建立了含內標監(jiān)控物的新孢子蟲病多重PCR檢測方法；根據(jù)GenBank上發(fā)表的牛新孢子蟲Nc5基因序列和弓形蟲GRA6基因序列，設計合成兩對特異性引物和兩條熒光探針，建立了同時檢測新孢子蟲病和弓形蟲病的雙重熒光定量PCR檢

3、測方法；根據(jù)新孢子蟲NcSAG1基因、Nc5基因、NcSRS2基因、牛性腺基因和弓形蟲GRA6基因，設計合成相應的五對特異性引物和五條芯片寡核苷酸探針，將各自的標有熒光染料的PCR產物變性后與芯片上的寡核苷酸探針雜交，建立了以牛性腺基因為內標、弓形蟲GRA6基因為對照的新孢子蟲病多基因芯片檢測方法。
　　結果：本研究成功地建立了新孢子蟲病的三種分子生物學檢測方法。
　　結論：試驗表明，這三種方法均具有良好的特異性、敏感性和重