生態(tài)循環(huán)水養(yǎng)殖池塘微生物群落結(jié)構(gòu)特征初步分析.pdf

1、生態(tài)循環(huán)水養(yǎng)殖池塘是將人工濕地和養(yǎng)殖池塘有機(jī)結(jié)合的一種新型的養(yǎng)殖模式，在未來具有良好的發(fā)展前途。池塘中的微生物組成對(duì)于生物監(jiān)測和生物修復(fù)具有重要的意義，淡水生境中存在大量不可培養(yǎng)的微生物，使得傳統(tǒng)的培養(yǎng)技術(shù)方法無法對(duì)微生物群落結(jié)構(gòu)的多樣性進(jìn)行深入而全面的研究，而分子生物學(xué)的發(fā)展則提供了一種有效手段。為了探究系統(tǒng)中的微生物群落結(jié)構(gòu)組成特征，為該新型水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)提供一定的科學(xué)依據(jù)。本文利用PCR-DGGE方法對(duì)此系統(tǒng)中水樣和底泥樣中的微生物

2、群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析。 在2008年的6月到10月，每月采集五個(gè)循環(huán)塘和一個(gè)對(duì)照池塘的水樣和底泥樣品，提取DNA，擴(kuò)增其16SrRNAV3區(qū)。在變性劑梯度為20％～50％，電壓80V，電泳時(shí)間12小時(shí)的條件下DGGE條帶的分離效果最好。 水樣的DGGE圖譜顯示了較高的微生物豐度，且樣本在空間和時(shí)間上均有較大的差異，具體表現(xiàn)在條帶的數(shù)量、位置及亮度的不同。Quantityone軟件包分析結(jié)果顯示了對(duì)照塘不同于循環(huán)塘的微生物群

3、落結(jié)構(gòu)，說明生態(tài)循環(huán)水養(yǎng)殖在一定程度上改變了池塘的微生態(tài)環(huán)境，而這種改變主要是通過人工濕地的凈化作用來完成的。13條特征條帶的測序共得到4類細(xì)菌：放線菌門（Acinetobacteria）、變形菌門（Proteobacteria）、擬桿菌門（Bacteroides）、藍(lán)細(xì)菌門（Cyanobacteria），其中兩條藍(lán)細(xì)菌特定分布在對(duì)照塘中。主成分分析證明了對(duì)照塘與循環(huán)塘微生物群落結(jié)構(gòu)組成的差異性，典型對(duì)應(yīng)分析結(jié)果則證明溶解氧對(duì)于微生物群

4、落組成的相關(guān)程度最大，其次為氮磷水平。 底泥微生物的DGGE顯示了29條不同類型的條帶，群落結(jié)構(gòu)較為單一，說明底泥中的微生物豐度并不是很高，且樣本在空間和時(shí)間上差異性亦不大，菌群結(jié)構(gòu)相似程度比較高，微生物群落結(jié)構(gòu)基本恒定。選取其中9條穩(wěn)定的條帶進(jìn)行割膠測序分析，獲得的序列分為4個(gè)細(xì)菌類群：變形菌門（Proteobacteria）、疣微菌（Verrucomivrobia）、擬桿菌門（Bacteroides）、綠屈撓菌（Chloro