hcv抗體檢測方法與檢測策略

1、概述,結(jié)合《丙型肝炎病毒實驗室檢測技術(shù)規(guī)范（試行）》相關(guān)內(nèi)容介紹丙型肝炎病毒抗體檢測方法與檢測策略丙型肝炎病毒抗體檢測的實驗室內(nèi)質(zhì)量控制,《丙型肝炎病毒實驗室檢測技術(shù)規(guī)范（試行）》抗體檢測相關(guān)部分解讀,《丙型肝炎病毒實驗室檢測技術(shù)規(guī)范》,4,《丙型肝炎病毒實驗室檢測技術(shù)規(guī)范》,《規(guī)范》共分9章，首次依據(jù)不同檢測目的制定了不同的檢測策略： 1．疫情監(jiān)測相關(guān)的檢測策略 2．臨床診斷相關(guān)的檢測策略

2、 3．血液篩查相關(guān)的檢測策略,5,《丙型肝炎病毒實驗室檢測技術(shù)規(guī)范》,《規(guī)范》首次在臨床診斷中規(guī)定了HCV抗體篩查陽性反應(yīng)后必須進(jìn)行補(bǔ)充實驗（免疫印跡或NAT）?！兑?guī)范》首次在丙肝臨床診斷中引入S/CO比值的使用?！兑?guī)范》首次在血液篩查策略中規(guī)定了核酸檢測（含pooling PCR）?！兑?guī)范》首次明確丙肝檢測實驗室質(zhì)量控制。,免疫診斷的特異性： NS3 > core > NS4 > NS5

3、,HCV免疫診斷抗原的策略,NS3+coreNS3+core+NS4NS3+core+NS4+NS5,HCV抗體檢測方法,篩查試驗補(bǔ)充試驗：蛋白印跡試驗,酶聯(lián)免疫吸附試驗化學(xué)發(fā)光試驗?zāi)z體金法快速試驗,化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（CLEIA）:HRP標(biāo)記、ELEIA、ALP標(biāo)記免疫滲濾試驗免疫層析試驗,,,,檢測模式的改進(jìn),雅培Axysm羅氏Elecsys,雅培Architec

4、t,9,增加了核心區(qū)（C22-3）和NS3（ C33C）區(qū)抗原，檢測的敏感性和特異性較第一代RIBA有所提高。,所用抗原由核心區(qū)的C22、NS3區(qū)的C33C、NS4區(qū)的5-1-1和C100及NS5抗原組成，較之第二代試劑增加了NS5。,1990年Chiron/Ortho公司聯(lián)合研制了第一代RIBA試劑 ，兩種HCV抗原即C100-3和5-1-1分別固定在硝酸纖維素膜上 。,,,第一代,第二代,第三代,HCV確證試劑的發(fā)展,Chiron

5、RIBA HCV 3.0 SIA,,Chiron RIBA HCV 3.0 SIA,高低兩個水平的人lgG內(nèi)部質(zhì)控，必須清晰可見，且2>1。陽性對照條膜上雖有HCV帶必須是2+或更強(qiáng)，hSOD條帶必須明顯的比人lgG內(nèi)部質(zhì)控水平1淺（-or+/-）。陰性對照條膜必須能夠見到每個HCV和hSOD條帶，且比人lgG內(nèi)部質(zhì)控水平淺。,13,HCV Blot 3.0（MP）,,,,,,,,,,,,,,,,GST質(zhì)控帶,,HCV蛋白,,

6、確證試劑,包含HCV蛋白,血清質(zhì)控帶,血清轉(zhuǎn)換期樣本,注：1，2，3為陽性樣本4為陰性樣本,14,HCV BLOT 3.0(MP)結(jié)果分析,萬泰HCV 抗體確證試劑,本試劑應(yīng)用重組免疫印跡法原理，在硝酸纖維素膜條上預(yù)包被HCV合成抗原、重組抗原（Core，NS3，NS4，NS5）及對照線蛋白。將硝酸纖維素膜條浸泡在稀釋的血清或血漿樣品中反應(yīng)后，加入酶標(biāo)記的抗人IgG抗體溫育，如樣品中含有HCV特異性抗體，則會形成“包被抗原-抗體-酶標(biāo)

7、二抗”復(fù)合物，加入底物液顯色終止后，根據(jù)出現(xiàn)的不同條帶情況判斷結(jié)果。,Chiron,萬泰,每條實驗結(jié)果中，對照線-2必須出現(xiàn)，如果對照線-2不出現(xiàn)，則此條的檢測結(jié)果無效。,萬泰HCV 抗體確證試劑,丙型肝炎病毒,丙肝抗體假陰性問題,HCV窗口期,—TRANSFUSION Volume 40, February 2000,丙型肝炎病毒抗體檢測策略,HCV感染疫情報告的檢測流程,HCV血液篩查的檢測流程,HCV核酸定性檢測用于血液篩查策略

8、及結(jié)果報告,HCV臨床診斷篩查的檢測流程,HCV臨床診斷補(bǔ)充試驗檢測流程（1）,HCV臨床診斷補(bǔ)充試驗檢測流程（2）,HCV核酸定性檢測用于臨床診斷策略及結(jié)果報告3,檢測結(jié)果的解釋,檢測結(jié)果的解釋,HCV檢測試劑使用要求,必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)的快速試劑{詳細(xì)信息可登錄國家藥品食品管理局網(wǎng)站（http://app1.sfda.gov.cn/）查詢}。 試劑必須在有效期內(nèi)使用。 推薦使用臨床評估質(zhì)量好的試劑{中

9、國疾病預(yù)防控制中心網(wǎng)站（http://www.chinaids.org.cn）}。,2011年HCV抗體診斷試劑質(zhì)量評估結(jié)果,HCV免疫學(xué)檢測試劑,,檢測目的 檢測方法 檢測策略及 結(jié)果報告 檢測的意義,HCV抗原檢測,HCV抗原檢測,檢測目的HCV感染的早期診斷：窗口期，HCV（+）母親所生的嬰兒； 免疫受損或缺陷； 抗-HCV陽性患者的病毒血癥分析； 以流行病監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HCV感染率及其變化趨

10、勢。,HCV抗原檢測的方法發(fā)展：一,HCV抗原檢測原理示意圖,檢測策略及 結(jié)果報告,HCV抗原檢測結(jié)果解釋,a. HCV抗原檢測陰性：HCV(-)HCV抗原初次檢測（+），需雙孔復(fù)檢： 若均為（-）則報告為HCV（-）； 若雙孔有一孔為（+），則報告為HCV（+）,HCV抗原檢測的意義,丙型肝炎病毒抗原檢測,丙型肝炎病毒抗原檢測結(jié)果解釋,HCV抗原檢測試劑,,質(zhì)量保證體系循環(huán),檢測前,檢測,檢測后,,,,

11、實驗數(shù)據(jù)及實驗室的管理安全性客服,患者/客戶準(zhǔn)備采集樣本,樣品的接收與登記,樣本的遞送,質(zhì)量控制,檢驗結(jié)果的保存,報告結(jié)果,對工作人員檢測能力的資格評估,檢測,質(zhì)控用材料的選擇-校準(zhǔn)品,用于對設(shè)備、試劑盒以及檢測系統(tǒng)做出校準(zhǔn)，以便于測定過程的標(biāo)準(zhǔn)化盡管這些物質(zhì)不是真正的標(biāo)準(zhǔn)品，但有時也稱其為標(biāo)準(zhǔn)品,質(zhì)控用材料的選擇-質(zhì)控品,已知濃度的被分析物兩或三個濃度 檢測時加入到病例樣本中用于驗證檢測體系的可靠性,質(zhì)控用材料重要

12、特征,其值應(yīng)覆蓋臨床高、中、低值 與檢測樣本（基質(zhì)）相似可大量獲取小量分裝貯存最好能至少持續(xù)使用1年通常為生物材料，應(yīng)充分考慮到其生物危害性,對質(zhì)控用材料的管理,需儲備足量的同一批號的質(zhì)控用材料或至少夠一年使用可凍存、凍干或采用化學(xué)方法進(jìn)行保存應(yīng)保證其復(fù)原的準(zhǔn)確性應(yīng)按照生產(chǎn)商推薦的方法進(jìn)行貯存,質(zhì)控樣本的來源,適宜的診斷用樣本（患者樣本）來自下述途徑：另一個實驗室 PT/EQA 提供者市售產(chǎn)品,質(zhì)控用材料的類型

13、,定值相關(guān)數(shù)值由生產(chǎn)商提供實驗室必須對其進(jìn)行驗證非定值相對較便宜需進(jìn)行數(shù)據(jù)分析“自制產(chǎn)品” 或 “內(nèi)部產(chǎn)品” 實驗室自行采集的血清庫予以標(biāo)明小量分裝保存，便于每日使用,Levey-Jennings 表 -對質(zhì)控值進(jìn)行記錄和評價,平均值,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1SD,-2SD,-3SD,Westgard 規(guī)則,“多規(guī)則質(zhì)量控制方法” 聯(lián)合使用判定標(biāo)準(zhǔn)或質(zhì)控規(guī)則可對某種檢測分析“是否”符合質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)做出判

14、斷,Westgard 規(guī)則 (通常情況下適用于在一次檢測中同時采用兩個濃度的質(zhì)控材料的情況),12S 規(guī)則13S規(guī)則22S規(guī)則,R4S規(guī)則41S規(guī)則10X規(guī)則,Westgard – 12S 規(guī)則,“警告規(guī)則”兩個濃度的質(zhì)控材料中有一個濃度的結(jié)果在±2SD以外對可能存在的問題提出警報不能構(gòu)成拒絕檢測的原因必須再以13S 規(guī)則對其進(jìn)行評價,12S Rule = 一種能夠引發(fā)對質(zhì)控數(shù)據(jù)進(jìn)行仔細(xì)核查的警報規(guī)則,平均值

15、,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1SD,-2SD,-3SD,不符合12S 規(guī)則,Westgard – 13S 規(guī)則,如果兩個質(zhì)控數(shù)據(jù)中有任意一個落在±3SD范圍以外，則表示該次檢測不符合Westgard規(guī)則應(yīng)拒絕該次檢測如果該檢測沒有破壞 13S規(guī)則，則應(yīng)對其進(jìn)行22S 規(guī)則評價,13S 規(guī)則 = 如果任意一項質(zhì)控數(shù)據(jù)超出+3SD 或-3SD的控制范圍，則應(yīng)拒絕該次檢測,平均值,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1

16、SD,-2SD,-3SD,不符合13S 規(guī)則,Westgard – 22S 規(guī)則,如果同濃度檢測材料的兩相鄰值在同方向上超出±2SD 范圍，或同次檢測的兩個質(zhì)控數(shù)值均超過 ±2SD 不得對該患者的檢測結(jié)果出具報告應(yīng)采取修正措施,22S 規(guī)則 = 如果連續(xù)的兩次質(zhì)控測量值在同方向上均超過+2SD 或 -2SD的限度范圍，則應(yīng)拒絕該次檢測,平均值,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1SD,-2SD,-3SD,不符

17、合22S 規(guī)則,,Westgard – R4S 規(guī)則,一個質(zhì)控數(shù)據(jù)超過平均值的–2SD，另一個質(zhì)控數(shù)據(jù)超過平均值的+2SD 這兩次結(jié)果的偏差范圍將超過4 SD 產(chǎn)生隨機(jī)誤差，必須拒絕該次檢測,R4S 規(guī)則 = 當(dāng)一質(zhì)控測量值超過+2SD 而另一質(zhì)控值超過-2SD 的限度范圍時，應(yīng)拒絕該次檢測,平均值,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1SD,-2SD,-3SD,不符合R4S 規(guī)則,,Westgard – 41S 規(guī)則,需要提供以前

18、檢測的質(zhì)控數(shù)據(jù)當(dāng)某一濃度下有四次連續(xù)的質(zhì)控數(shù)據(jù)超過±1SD范圍，或兩個濃度下的質(zhì)控數(shù)據(jù)均出現(xiàn)連續(xù)的檢測結(jié)果超出±1SD 范圍的現(xiàn)象,Westgard – 10X 規(guī)則,需要提供以往檢測的質(zhì)控資料某一濃度下有十次連續(xù)的質(zhì)控檢測結(jié)果在平均值的同一側(cè)，或兩個濃度下的質(zhì)控數(shù)據(jù)均有五次連續(xù)的檢測結(jié)果在平均值的同一側(cè),10x 規(guī)則 = 當(dāng)10次連續(xù)的質(zhì)控檢測結(jié)果在平均值的同一側(cè)時應(yīng)拒絕該次檢測,平均值,天,+1SD,+2