hiv抗體檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序

1、HIV抗體檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序,天津市衛(wèi)生防病中心 夏建暉,《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（2004年版）共10章,,,* 樣品的采集和處理 * HIV抗體檢測* HIV核酸定性檢測 * HIV RNA定量測定（病毒載量測定）* CD4+ 和CD8+ T淋巴細(xì)胞檢測 * HIV抗原檢測* 艾滋病實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)和職業(yè)暴露預(yù)防* 艾滋病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理* 艾滋病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量考評辦法* HIV診斷試劑臨床質(zhì)量

2、評估方案,HIV抗體檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序,檢測程序： 生物安全： 試驗(yàn)操作： 室內(nèi)質(zhì)控：,《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》中的許多內(nèi)容，廣泛適用于臨床實(shí)驗(yàn)室。,HIV抗體檢測程序:初篩-復(fù)檢-確認(rèn),復(fù)檢：對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。,HIV抗體檢測

3、程序:初篩-復(fù)檢-確認(rèn),重新采血，將兩份標(biāo)本一同送檢,HIV抗體復(fù)檢化驗(yàn)單見《技術(shù)規(guī)范》附表2,見《技術(shù)規(guī)范》附表2,HIV抗體檢測程序:現(xiàn)象一,出現(xiàn)HIV抗體篩查陽性時(shí)，有的實(shí)驗(yàn)室僅是通知受檢者到確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室采血檢測，不向確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室送原血樣和HIV抗體復(fù)檢化驗(yàn)單。這樣是不符合要求的。 篩查陽性時(shí)，必須將原血樣和HIV抗體復(fù)檢化驗(yàn)單送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室。最好是在送樣單上注明聯(lián)系電話，以便及時(shí)反饋結(jié)果。,HIV抗體檢測程序:現(xiàn)象二,出現(xiàn)HI

4、V抗體篩查陽性時(shí)，有的單位過度重視，在沒得到確認(rèn)結(jié)果時(shí)，將受檢者作為HIV感染者對待，造成不必要的恐慌。 天津目前一般人群的HIV感染率在萬分之一左右 ，尚屬于低發(fā)區(qū)。 在術(shù)前、產(chǎn)前篩查中會出現(xiàn)許多篩查陽性、經(jīng)確認(rèn)為陰性的情況。 出現(xiàn)HIV抗體篩查陽性時(shí)，實(shí)驗(yàn)室沒有必要擴(kuò)大知情范圍，及時(shí)送檢。 縮小知情范圍，可能有助于減少恐慌。 HIV感染者，與乙肝感染者的消毒處理措施沒有什么差別。

5、 〔就傳染性而言，乙肝病毒更為兇險(xiǎn)〕,生物安全,《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》國家標(biāo)準(zhǔn)已正式發(fā)布， 并于2004年10月1日正式實(shí)施。 規(guī)定了實(shí)驗(yàn)室生物安全管理和實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)原則 同時(shí)還規(guī)定了生物安全分級、 實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備的配置、 個(gè)人防護(hù)和實(shí)驗(yàn)室安全行為等方面內(nèi)容。 該標(biāo)準(zhǔn)解決了實(shí)驗(yàn)室安

6、全管理存在的隱患。,生物安全,《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》 第二章[HIV抗體檢測]中提出 “HIV抗體檢測實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》對II級生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）的各項(xiàng)要求。” 第七章[艾滋病實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)和職業(yè)暴露預(yù)防]中進(jìn)一步指出 “艾滋病血清學(xué)檢測（包括篩查和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室）、免疫學(xué)和核酸檢測應(yīng)在符合Ⅱ級生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行?！?生物安全,Ⅱ級生物安全實(shí)

7、驗(yàn)室，是對臨床實(shí)驗(yàn)室的普遍要求， 是臨床實(shí)驗(yàn)室發(fā)展的方向。 一份未知樣品，無論檢測項(xiàng)目如何，都具有相同的潛在傳染性。安全投入不足，將成為今后臨床實(shí)驗(yàn)室的重要隱患,生物安全,,生物安全,,,,,,,生物安全,,危害等級II（中等個(gè)體危害，有限群體危害）能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴(yán)重危害的病原體。實(shí)驗(yàn)室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和

8、預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險(xiǎn)有限。危害等級III（高個(gè)體危害，低群體危害）能引起人類或動物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶然接觸而在個(gè)體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原體。,Ⅱ級生物安全實(shí)驗(yàn)室設(shè)施和設(shè)備要求 (《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》),,u  實(shí)驗(yàn)室所用設(shè)施、設(shè)備和材料（含防護(hù)屏障）均應(yīng)符合國家相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)和要求 u  BSL-2 實(shí)驗(yàn)室滿足BSL-1的要求。  實(shí)驗(yàn)

9、室門應(yīng)帶鎖并可自動關(guān)閉。實(shí)驗(yàn)室的門應(yīng)有可視窗。 應(yīng)有足夠的存儲空間擺放物品以方便使用。在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域外還應(yīng)當(dāng)有供長期使用的存儲空間。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)使用專門的工作服；應(yīng)戴乳膠手套。在實(shí)驗(yàn)室的工作區(qū)域外應(yīng)有存放個(gè)人衣物的條件。在實(shí)驗(yàn)室所在的建筑內(nèi)應(yīng)配備高壓蒸汽滅菌器，并按期檢查和驗(yàn)證，以保證符合要求。應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配備生物安全柜(避免的危害：氣溶膠和噴濺)。應(yīng)設(shè)洗眼設(shè)施，必要時(shí)應(yīng)有應(yīng)急噴淋裝置。應(yīng)通風(fēng)，如使用窗戶自然通風(fēng)，應(yīng)有防

10、蟲紗窗。有可靠的電力供應(yīng)和應(yīng)急照明。必要時(shí)，重要設(shè)備如培養(yǎng)箱、生物安全柜、冰箱等應(yīng)設(shè)備用電源。實(shí)驗(yàn)室出口應(yīng)有在黑暗中可明確辨認(rèn)的標(biāo)識。,生物安全 生物安全柜(避免的危害：氣溶膠和噴濺),,確定可能形成傳染性氣溶膠或?yàn)R出物的實(shí)驗(yàn)過程包括:離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器(容器內(nèi)部的壓力可能與大氣壓不一致)、動物鼻孔接種、從動物或胚胎卵采集感染組織。,生物安全,,,,,,,,,生物安全,,,,,,,

11、,,,生物安全,,,,,,,,,,,生物安全,,,,,,,,,,生物安全,,,,,,,,,對于已經(jīng)建成的實(shí)驗(yàn)室，由于格局無法改變，需要提醒大家注意:應(yīng)努力將工作區(qū)與休息區(qū)分離，并盡可能滿足生物安全實(shí)驗(yàn)室的其它要求。個(gè)人防護(hù)裝備：手套與實(shí)驗(yàn)室工作服²  手套：所戴手套無漏損。戴好手套后可完全遮住手及腕部，如必要，可覆蓋實(shí)驗(yàn)室長罩服或外衣的袖子（一次性袖套）。在撕破、損壞或懷疑內(nèi)部受污染時(shí)更換手套。手套為實(shí)

12、驗(yàn)室工作專用。在工作完成或中止后應(yīng)消毒、摘掉并安全處置。²   實(shí)驗(yàn)室工作服:離開實(shí)驗(yàn)室區(qū)域之前應(yīng)脫去防護(hù)服。當(dāng)具潛在危險(xiǎn)的物質(zhì)極有可能濺到工作人員時(shí)，應(yīng)使用塑料圍裙或防液體的長罩服。,生物安全,,,,,,,,,,生物安全 實(shí)驗(yàn)操作中的生物安全注意事項(xiàng)：,,,,,,,,,進(jìn)實(shí)驗(yàn)室前要摘除首飾，修剪長的帶刺的指甲，以免刺破手套。長發(fā)應(yīng)束在腦后。在工作區(qū)內(nèi)不應(yīng)配帶戒指、耳環(huán)、腕表、手鐲、

13、項(xiàng)鏈和其他珠寶。l 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿隔離衣，戴手套。必要時(shí)（手套質(zhì)量欠佳或接觸物傳染危險(xiǎn)性大），則應(yīng)戴雙層手套和防護(hù)眼鏡。²  嚴(yán)禁在艾滋病實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)食、飲水、吸煙和化妝。²  不用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發(fā)等。²  食品、飲料及類似物品只應(yīng)在指定的區(qū)域中準(zhǔn)備和食用。食品和飲料只應(yīng)存 放于非實(shí)驗(yàn)室區(qū)域內(nèi)指定的專用處。冰箱應(yīng)適當(dāng)標(biāo)記以

14、明確其規(guī)定用途。²   禁止在工作區(qū)內(nèi)使用化妝品和處理隱形眼鏡。l   離開實(shí)驗(yàn)室前必須脫去隔離衣，并洗手。 工作完畢，脫去手套后洗手，再脫去工作衣，用肥皂和流動水洗手。,HIV抗體檢測技術(shù)要求,建立標(biāo)準(zhǔn)操作程序禁止肉眼判讀！保證酶標(biāo)儀，洗板機(jī)正常運(yùn)轉(zhuǎn)保證加樣器準(zhǔn)確選擇高質(zhì)量的與加樣器配套的TIP頭使用有效期內(nèi)的試劑保證樣品質(zhì)量,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

15、,ELISA是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法，由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便、結(jié)果判斷較客觀等因素，以及既適宜于大規(guī)模篩查試驗(yàn)又可以用于少量標(biāo)本的檢測，既可以做定性試驗(yàn)也可以做半定量分析等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子等領(lǐng)域。ELISA的影響因素較多，加強(qiáng)質(zhì)量管理才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。HIV抗體檢測中常規(guī)使用ELISA試驗(yàn),酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,1971年Engvall等人把

16、免疫組化的EIA技術(shù)應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)發(fā)展為ELISA技術(shù)，酶聯(lián)免疫吸附劑試驗(yàn)。特點(diǎn) ： 在聚苯乙烯固相載體表面組裝免疫活性物質(zhì)形成“免疫吸附劑” 酶標(biāo)記免疫活性物質(zhì)，化學(xué)顯色劑進(jìn)行信號放大,ELISA試驗(yàn)結(jié)果判斷,在進(jìn)行ELISA試驗(yàn)時(shí)，要嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。按照說明書中的方法，計(jì)算臨界值（Cutoff值）。 樣品OD值≥臨界值 陽性 樣品OD值< 臨界值

17、 陰性,注意事項(xiàng),保證實(shí)驗(yàn)室溫度，室溫過低有可能造成吸光度值偏低。 ELISA試驗(yàn)的敏感性很高，如果操作不當(dāng)很容易出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。在操作過程中，尤其應(yīng)注意洗滌過程。洗滌徹底可減少假陽性的機(jī)會。進(jìn)行ELISA試驗(yàn)時(shí)，必須用酶標(biāo)儀進(jìn)行測定，不得目測結(jié)果。使用酶標(biāo)儀時(shí)，要避免酶標(biāo)孔內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響判讀結(jié)果。初篩陽性標(biāo)本應(yīng)做進(jìn)一步確認(rèn)。灰區(qū),灰區(qū),定義：通常把在臨界值(Cutoff)下10％

18、 的OD值標(biāo)本定為灰色帶反應(yīng)。 處理原則：對這類標(biāo)本包括OD值等于 或略高于Cutoff值的標(biāo)本，建議 進(jìn)行復(fù)檢或用其他方法(不同類 型的篩查試劑或確證試劑)進(jìn)行 復(fù)檢，這將有助于發(fā)現(xiàn)早期感染 者。,ELISA操作中的注意事項(xiàng),試劑準(zhǔn)備加樣

19、溫育洗板顯色比色,試劑準(zhǔn)備,從冰箱中取出的試劑，待溫度與室溫平衡后使用；所用蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。,加 樣,加樣不可太快，避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。,孵育,ELISA孵育：水浴箱？干燥恒溫箱？由于水的比熱大于空氣的，水浴箱里的各部分溫差要小于恒溫箱中的。 水浴箱也有他的不足出就是有水氣對比色有影響 恒溫箱沒有水氣，不會對杯底有干擾孵育時(shí)，一定要用膠紙封將板子封好，而且不要

20、疊放,洗 板,洗板液一般為含0.05% Tween20的中性PBS。Tween20為一種非離子去垢劑，既含親水基團(tuán)，也含疏水基團(tuán)。洗滌作用機(jī)理，借助其疏水基團(tuán)與固相上蛋白的疏水基團(tuán)形成疏水鍵，從而削弱蛋白與固相的吸附，同時(shí)在其親水基團(tuán)與液相中水分子的結(jié)合作用下，促使蛋白質(zhì)脫離固相而進(jìn)入液相,,ELISA試驗(yàn)中的疑問：洗板,洗滌在ELISA過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟，卻也決定著實(shí)驗(yàn)成敗ELSIA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)

21、記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來?？梢哉f在ELISA操作中，洗滌是最關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，應(yīng)引起操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌，不得馬虎。,ELISA試驗(yàn)中的疑問,洗板：洗板機(jī)? 手工? 只要操作合乎要求，都能得到正確的結(jié)果。 最后要用吸

22、水紙徹底拍干，方能得到好的結(jié)果。,ELISA試驗(yàn)中的疑問,洗板機(jī)：更為科學(xué)合理，效率高加強(qiáng)日常保養(yǎng)、維護(hù)，預(yù)防洗板機(jī)堵孔和機(jī)械故障 。合理設(shè)置洗板機(jī)參數(shù)，避免孔間交叉污染，減少殘留液 （沖洗針位置調(diào)整好） （U or 平底）出現(xiàn)問題及時(shí)與廠家聯(lián)系,ELISA試驗(yàn)中的疑問,手工洗板：如何避免孔與孔之間的交叉污染。第一次加液加8成（因?yàn)榇藭r(shí)候污染的機(jī)會也最大），甩掉液體后立即扣干，

23、以后按照說明書要求進(jìn)行洗板。,顯 色,加入底物A和B后，應(yīng)振蕩混勻當(dāng)?shù)孜餅镺PD時(shí)，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行一般商品試劑盒顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15～30 min。（以試劑說明為準(zhǔn)）,顯 色,顯色是ELISA中的最后一步溫育反應(yīng)，此時(shí)酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍是影響顯色的因素。在一定時(shí)間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時(shí)間的延長而呈色加強(qiáng)。各類酸性終止液則會使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色，此時(shí)可用特定的波長（45

24、0nm）測讀吸光值。,比 色,加酸終止顯色反應(yīng)后，比色測定前應(yīng)振蕩混勻 測定時(shí)，要注意酶標(biāo)儀的波長是否已調(diào)至合適 比較好的酶標(biāo)儀可選擇單波長或雙波長比色測定，所謂雙波長比色，即在敏感波長（此時(shí)對所顯色具最大光吸收）如450 nm和非敏感波長（所測得的光吸收為微孔板上的劃痕、污跡以及指紋等所致），最后從儀器得到的讀數(shù)為在敏感波長測得的吸光度與非敏感波長測得的吸光度之差。,比 色,酶標(biāo)儀的可測范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同。普通的酶標(biāo)

25、儀在0.000－2.000，新型號的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900，甚至更高。超出可測上限的A值常以“*”或“over”或其它符號表示。應(yīng)注意可測范圍與線性范圍的不同，線性范圍常小于可測范圍，比如某一酶標(biāo)儀的可測范圍為0.000－2.900，而其線性范圍僅0.000－2.000，這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)予注意。酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下，操作時(shí)室溫宜在15－30℃，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定。,,E

26、LISA試驗(yàn)中假陽性產(chǎn)生原因？,ELISA試驗(yàn)中的疑問：假陽性產(chǎn)生原因？,樣品加錯(cuò)位置，標(biāo)本搞錯(cuò)洗板機(jī)設(shè)置不當(dāng)，洗板時(shí)洗滌液溢出，污染其它孔洗板機(jī)內(nèi)部管道有真菌生長實(shí)驗(yàn)中，實(shí)際孵育時(shí)間過長，溫度過高待測標(biāo)本溶血或含有血細(xì)胞。 待測標(biāo)本長菌或其它原因混濁。不明原因的假陽性．,假陽性產(chǎn)生原因？ 標(biāo)本溶血,注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中

27、，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。,假陽性產(chǎn)生原因？標(biāo)本被細(xì)菌污染,細(xì)菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。,假陽性產(chǎn)生原因？標(biāo)本貯存時(shí)間過長,標(biāo)本在2~8℃下保存時(shí)間過長，IgG可聚合成多聚體，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性。

28、血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時(shí)間保存，應(yīng)在－70℃以下。,假陽性產(chǎn)生原因？標(biāo)本凝固不全,血液采集后，如收集管中無促凝劑和抗凝劑，則血液通常在半小時(shí)后開始凝固，18~24h完全凝固。日常檢驗(yàn)中，常在血液還未開始凝固時(shí)即離心分離血清，此時(shí)因血液沒有完全凝固，離出的“血清”并非為完全的血清，其中仍殘留部分纖維蛋白原，如將其加入微孔中，在ELISA測定過程中仍可以形成肉眼可見的

29、纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果血液標(biāo)本采集后，應(yīng)使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?冰凍保存標(biāo)本避免反復(fù)凍融,反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。,影響ELISA測定的因素,試劑盒的因素： 妥善保存試劑，在有效期內(nèi)使用試驗(yàn)操作 形成良好的操作習(xí)慣：加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不

30、可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。 嚴(yán)格按試劑說明書操作:空白孔不加樣品和酶標(biāo)試劑 操作過程中集中精力：避免加樣錯(cuò)誤,什么是“花板”,空白和陰性，陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常，而標(biāo)本的陽性率很高，每板除對照孔外，有時(shí)陽性高達(dá)10孔之多，而大多數(shù)陽性標(biāo)本都出現(xiàn)弱陽性結(jié)果。這就是試驗(yàn)中所說的“花板”問題。這種現(xiàn)象對檢驗(yàn)結(jié)果的正常判斷造成了很大的影響。,“花板”產(chǎn)生的原因：,檢測過程存在瑕疵： 首先考慮檢測過程中的操作是否存在問

31、題。 通過完善的質(zhì)量控制措施，可以查找可能存在的操作問題，或排除“操作”造成“花板”的可能。2 試劑質(zhì)量問題：用戶，有權(quán)利反應(yīng)產(chǎn)品質(zhì)量問題，要求廠家提供服務(wù)。反映問題時(shí)要有根據(jù)，至少應(yīng)該能夠證明主要問題在于試劑質(zhì)量,在檢測過程中采取措施預(yù)防“花板”,1 抽取樣本時(shí)應(yīng)抽出足夠檢驗(yàn)量的血液標(biāo)本，按比例加抗凝劑，便于離心，得到足夠的血清（血漿）。2 血液標(biāo)本應(yīng)置于室溫下1～2h，使血液凝固收縮，然后離心檢測或讓血液過夜后再檢

32、測。這樣才能使得血液充分收縮，讓標(biāo)本中的非特異性物質(zhì)所致的假陽性率降至最低。3 檢測之前，加大離心轉(zhuǎn)速，盡量延長時(shí)間，使血細(xì)胞和纖維蛋白充分沉淀，讓血細(xì)胞與血清徹底分離。4 加樣時(shí)不能加入紅細(xì)胞或纖維蛋白，要按照操作說明書去做，否則會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。5 封板溫育時(shí)，各孔一定要封嚴(yán)，防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。6 用洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花

33、板”的出現(xiàn)。,提 問,某實(shí)驗(yàn)室將若干HIV抗體初篩陽性標(biāo)本，送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室檢測，確認(rèn)結(jié)果為陰性。此初篩實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量存在問題嗎？ 某HIV抗體初篩一年的檢測量在3000－5000份，所有試驗(yàn)均未出現(xiàn)呈陽性反應(yīng)的標(biāo)本，連續(xù)多年。此初篩實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量存在問題嗎？ 某實(shí)驗(yàn)室在使用某種ELISA試劑進(jìn)行HIV抗體初篩時(shí)，多次出現(xiàn)“花板”現(xiàn)象。此初篩實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量存在問題嗎？,在缺乏有效的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制和質(zhì)量管理的情況

34、下，不能排除實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量存在問題的可能。,某實(shí)驗(yàn)室將若干HIV抗體初篩陽性標(biāo)本，送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室檢測，確認(rèn)結(jié)果為陰性。此初篩實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量存在問題嗎？ 某HIV抗體初篩一年的檢測量在3000－5000份，所有試驗(yàn)均未出現(xiàn)呈陽性反應(yīng)的標(biāo)本，連續(xù)多年。此初篩實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量存在問題嗎？ 某實(shí)驗(yàn)室在使用某種ELISA試劑進(jìn)行HIV抗體初篩時(shí)，多次出現(xiàn)“花板”現(xiàn)象。此初篩實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量存在問題嗎？,《全國艾滋病檢測技術(shù)

35、規(guī)范》（2004年版）,第八章 艾滋病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理HIV抗體檢驗(yàn)質(zhì)量保證,質(zhì)量控制（quality control）,對醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)來說是實(shí)施醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量保證中的一部分，主要由實(shí)驗(yàn)室來完成，將質(zhì)控物和待測標(biāo)本一起進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，從控制值了解分析過程的質(zhì)量情況，同時(shí)使用一些統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行歸鈉和分析，嚴(yán)格控制外來誤差，所以質(zhì)量控制又被稱為過程質(zhì)量控制或統(tǒng)計(jì)質(zhì)量控制。,質(zhì)量控制（quality control）,在理論和實(shí)踐上，又可分為兩個(gè)主

36、要部分：室內(nèi)質(zhì)量控制：用來評價(jià)實(shí)驗(yàn)室批間精密度室間質(zhì)量評價(jià)/能力驗(yàn)證(Proficiency Testing) 目的在于幫助實(shí)驗(yàn)人員發(fā)現(xiàn)檢驗(yàn)的準(zhǔn)確度，以利提高實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作質(zhì)量。 每年的血清考評與能力驗(yàn)證本質(zhì)是相同 由于考評結(jié)果具有懲罰性，考核樣品經(jīng)常受到特殊照顧，并且存在互通結(jié)果的情況。作為組織者，為了使考評更為公正，不得不對樣品組成、樣品號順序進(jìn)行組合，減少互通結(jié)果的情況，從而偏離了能力驗(yàn)證的

37、目標(biāo)。,室內(nèi)質(zhì)量控制(internal quality control,IQC),全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范中要求：在每次實(shí)驗(yàn)中必須包含有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。n內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)。每一次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。n外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的一套對照血清，包括強(qiáng)陽性、弱陽性

38、和陰性對照血清。也可以只設(shè)置一個(gè)弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2?3倍為宜。,室內(nèi)質(zhì)量控制(internal quality control,IQC),全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范中要求： 在ELISA試驗(yàn)中每塊板加一孔外部對照。從國家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室購買了HIV抗體外部質(zhì)控對照血漿樣品，已經(jīng)在防病系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室使用。今年計(jì)劃首批選擇10家醫(yī)療單位進(jìn)行試點(diǎn)，今后逐步擴(kuò)大到所有的初篩實(shí)驗(yàn)室。在此之前，各實(shí)驗(yàn)室在

39、進(jìn)行ELISA試驗(yàn)時(shí)，必須嚴(yán)格按要求加內(nèi)對照質(zhì)控物。,室間質(zhì)量評價(jià)（external quality assessment,EQA）,為了能更為客觀的評價(jià)實(shí)驗(yàn)室檢測能力，明年準(zhǔn)備在部分單位（如：天津市市級哨點(diǎn)）試行將考評與能力驗(yàn)證分開。 能力驗(yàn)證活動，樣品組成完成相同。 能力驗(yàn)證活動不進(jìn)行排名，不與任何獎懲制度聯(lián)系。 參加能力驗(yàn)證的實(shí)驗(yàn)室用檢測臨床樣本一樣的方式檢測能力驗(yàn)證質(zhì)控品，既將質(zhì)控品放到常規(guī)檢測中去檢測，要反

40、映常規(guī)工作水平，不應(yīng)安排比常規(guī)檢驗(yàn)人員更高級實(shí)驗(yàn)人員檢測，檢測結(jié)果不應(yīng)受到“特殊的復(fù)查”，檢測人員不應(yīng)更改實(shí)驗(yàn)結(jié)果，或從其它參加能力驗(yàn)證的單位獲得結(jié)果。其目的在于，真實(shí)反映實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量，通過參加能力驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)自己實(shí)驗(yàn)室的問題，逐步提高檢測質(zhì)量。,室間質(zhì)量評價(jià)（external quality assessment,EQA）,只有首先搞好室內(nèi)質(zhì)量控制，保證檢驗(yàn)結(jié)果達(dá)到一定的精密度，才能得一較好的室間質(zhì)量評價(jià)成績，才談得上室間結(jié)果的可比性。