支氣管肺泡灌洗液相關(guān)實(shí)驗(yàn)室操作

1、王慶豐,支氣管肺泡灌洗液相關(guān)實(shí)驗(yàn)室操作,,,,延遲符,,,目 錄,CONTENTS,1,2,3,BALF標(biāo)本保存運(yùn)送,形態(tài)學(xué)檢查,病原學(xué)檢查,支氣管肺泡灌洗液（BALF） BALF是通過支氣管鏡向支氣管肺泡內(nèi)注入生理鹽水并進(jìn)行抽吸，收集肺泡表面液體，通過檢查細(xì)胞成分、可溶性物質(zhì)和感染性病原體，診斷肺部相關(guān)疾病、評價(jià)療效和預(yù)后。標(biāo)本包括：BALF和保護(hù)性毛刷（PSB）,適應(yīng)癥,肺部感染，特別是免疫受損患者肺部機(jī)會性感染

2、的病原體診斷。肺部不明原因陰影、疑似肺部感染或需與其他疾病鑒別。,BALF采集,BALF收集：由?？漆t(yī)生采集。用于病原學(xué)分析的標(biāo)本需用無菌容器收集；細(xì)胞學(xué)分析需選擇塑料容器或硅化的玻璃容器以減少細(xì)胞的黏附。送檢量至少5毫升（10-20毫升最佳）。,2024年3月11日,7,BALF標(biāo)本運(yùn)送與保存,室溫條件下2h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室。若延遲送檢，可將標(biāo)本放置于2～8℃保存，但不可超過24h。,BALF臨床應(yīng)用,,BALF診斷的疾病,彌

3、漫性間質(zhì)性肺病,2,3,1,4,職業(yè)性肺部疾病,延遲符,5,肺部感染,肺部腫瘤,兒科肺部疾病,延遲符,形態(tài)學(xué)檢查（細(xì)胞分類）,,淋巴、中性粒細(xì)胞 高倍,纖毛上皮細(xì)胞 油鏡,細(xì)胞學(xué)分類的臨床意義,中性粒細(xì)胞比例增高為主時(shí)，見于各種細(xì)菌或真菌等感染；淋巴細(xì)胞比例增高為主時(shí)，見于病毒性肺炎、結(jié)節(jié)病或過敏性肺炎。嗜酸粒細(xì)胞比例增高為主時(shí)，見于嗜酸粒細(xì)胞浸潤癥、支氣管哮喘等。,,延遲符,病原學(xué)檢查,BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測,顯微鏡檢查

4、 革蘭染色及BALF質(zhì)量評價(jià)：建議使用細(xì)胞離心機(jī)制片，取適量BALF標(biāo)本600～1 000 r/min離心10～20 min,進(jìn)行革蘭染色。低倍鏡下若鱗狀上皮細(xì)胞占全部細(xì)胞比例>1%，提示標(biāo)本被上呼吸道分泌物污染；柱狀上皮細(xì)胞>5%時(shí),提示BALF并非來自于遠(yuǎn)端氣腔。觀察革蘭染色結(jié)果及白細(xì)胞情況，如果見到噬菌現(xiàn)象，須報(bào)告吞噬細(xì)菌的中性粒細(xì)胞占或全部中性粒細(xì)胞的比例，通常數(shù)值為5%時(shí)可作為肺炎診斷的閾值。,BALF標(biāo)本病

5、原體實(shí)驗(yàn)室檢測,抗酸染色： 用于檢測分枝桿菌，弱抗酸染色可用于檢測奴卡菌。氫氧化鉀(KOH)壓片： 用于真菌，特別是絲狀真菌的形態(tài)學(xué)觀察。墨汁染色： 用于隱球菌的檢測。六胺銀染色： 常用于肺孢子菌的檢測。免疫熒光顯微鏡： 可用于軍團(tuán)菌、肺孢子菌及病毒的檢測。,BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測,一般細(xì)菌培養(yǎng)（定量培養(yǎng)）：（1）渦旋震蕩BALF標(biāo)本30～60s。（2）定量接種：用經(jīng)校準(zhǔn)的加樣器

6、（或定量接種環(huán)）取10μl 的BALF標(biāo)本，分別點(diǎn)種于血平板和巧克力平板上且密集劃線，有條件時(shí)最好采用滅菌L型玻棒涂布平板。還可取100μlBALF接種于麥康凱或中國藍(lán)培養(yǎng)基。（3）孵育：將接種的平板放在二氧化碳培養(yǎng)箱（5%～10%CO2）中，35℃培養(yǎng)48 h。,BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測,一般細(xì)菌培養(yǎng)（定量培養(yǎng)）：（4）結(jié)果判定：分別對不同形態(tài)的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，乘上稀釋倍數(shù)即為此細(xì)菌的菌落數(shù)。菌落計(jì)數(shù)BALF≥104 CFU/

7、ml或無菌防污染BALF≥103CFU/ml時(shí)認(rèn)為是可能的病原菌，但不能機(jī)械使用該閾值，還要結(jié)合患者的實(shí)際情況及有無使用抗菌藥物等因素綜合判斷。,BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測,真菌培養(yǎng)： BALF標(biāo)本1500～1800×g，離心15～20min，沉淀物混勻后接種于沙保平板上，30℃和35℃孵育7d，懷疑雙相真菌時(shí)應(yīng)使用帶螺帽的培養(yǎng)基，孵育6周。特殊病原菌培養(yǎng)： BALF離心后的沉淀物還可用于分枝桿菌、軍團(tuán)菌及

8、病毒等的培養(yǎng)。,BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測,核酸檢測： 用于病毒、軍團(tuán)菌、肺孢子菌或分枝桿菌等的檢測。真菌抗原： 半乳甘露聚糖試驗(yàn)（GM試驗(yàn)）主要用于曲霉的檢測；目前有關(guān)BALF檢測隱球菌莢膜抗原的研究證據(jù)較少，可考慮作為診斷的補(bǔ)充手段。,BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測,,臨床意義,微生物學(xué)涂片檢查：BALF中的沉淀物進(jìn)行革蘭染色、抗酸染色及真菌的特殊染色，對細(xì)菌、分枝桿菌、真菌及寄生蟲的檢出有較大意義。微生物學(xué)培養(yǎng)

9、：在嚴(yán)格無菌操作下采集的BALF進(jìn)行直接接種培養(yǎng)或取其沉淀物進(jìn)行培養(yǎng)，對檢測細(xì)菌及真菌具有較大的臨床意義，BALF細(xì)菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)≥104CFU/ml或無菌防污染BALF≥103CFU/ml時(shí)具有臨床診斷意義。灌洗液中GM測定：取5~10ml灌洗液置于無菌容器中，4 h內(nèi)送檢；對于早期快速診斷侵襲性肺曲霉病，特別是氣道曲霉感染的患者具有重要的臨床價(jià)值。對于某些特殊病原體，如病毒、肺孢子菌及寄生蟲等可通過BALF中的抗原或核酸測定進(jìn)行診斷