中護(hù)微生物實(shí)驗(yàn)3細(xì)菌分布檢查與消毒滅菌實(shí)驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)三,細(xì)菌分布檢查與消毒滅菌實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.學(xué)會(huì)不同部位細(xì)菌的檢查方法。2.掌握常用的消毒滅菌方法及其儀器的使用。 3.了解藥敏實(shí)驗(yàn)的結(jié)果及意義。,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法,一、細(xì)菌的分布檢查1.空氣中細(xì)菌檢查2.咽喉部細(xì)菌的檢查二、消毒滅菌的實(shí)驗(yàn)1.皮膚消毒實(shí)驗(yàn)2.熱力滅菌實(shí)驗(yàn)3.紫外線(xiàn)殺菌實(shí)驗(yàn)4.常用消毒滅菌器及除菌濾器介紹三、藥物敏感實(shí)驗(yàn)

2、 常用消毒器械的介紹,一、細(xì)菌的分布檢查,1.空氣中細(xì)菌的檢查 材料:瓊脂平板 方法:將制作好的瓊脂平板敞開(kāi)放置在空氣中5min -10min,后蓋上皿蓋，然后分別做好標(biāo)記，37度溫箱內(nèi)培養(yǎng)18-24小時(shí)后觀察結(jié)果

3、。 意義：檢測(cè)環(huán)境達(dá)標(biāo)與否,2.咽喉部細(xì)菌的檢查,(1)咽喉拭子法：材料：血平皿、咽拭子 方法：1. 用干凈棉簽咽部取材； 2. 將取得樣本以分區(qū)劃線(xiàn)形式接種在血平皿上； 3. 37℃ 溫箱內(nèi)孵育24小時(shí)后觀察結(jié)果。,(2)咳碟法,取血平板一個(gè)，將蓋打開(kāi)，置于距口腔10厘米處，用力咳嗽數(shù)次，然后蓋好，置37度溫箱培養(yǎng)18-24小時(shí)觀察結(jié)果。,二、消毒滅菌的實(shí)驗(yàn),1.皮膚消毒試驗(yàn)（操作）每?jī)擅麑W(xué)生用一個(gè)瓊脂平板，先在平

4、板底部用蠟筆畫(huà)分5格，標(biāo)明序號(hào)。兩人用未消毒手指分別在1、2格內(nèi)涂布。然后用2%碘酒消毒手指后再分別涂抹3、4格，余下第5格作為空白對(duì)照。蓋上皿蓋，置37度溫箱培養(yǎng)24小時(shí)觀察結(jié)果。,皮膚消毒實(shí)驗(yàn) 材料：瓊脂平板、2.5%碘酒、75%酒精棉球 方法： 37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí) 意義：比較皮膚消毒前后細(xì)菌分布情況,,,消毒前,消毒后,,,2.熱力

5、滅菌實(shí)驗(yàn)（示教）,取4支肉湯培養(yǎng)基標(biāo)以1、2、3、4號(hào)1、2號(hào)接種大腸埃希菌（無(wú)芽孢菌）3號(hào)接種枯草芽胞桿菌（芽胞菌）4號(hào)管不接種細(xì)菌作對(duì)照。將其中1、3號(hào)同時(shí)放入100度水浴內(nèi)煮沸5分鐘。然后將4支管同時(shí)置37度溫箱培養(yǎng)24小時(shí)觀察結(jié)果。,3.紫外線(xiàn)殺菌實(shí)驗(yàn) 材料：瓊脂平板、細(xì)菌培養(yǎng)物、滅菌長(zhǎng)方形紙片方法：取普通瓊脂平板一個(gè)，密集畫(huà)線(xiàn)接種大腸埃希菌。用無(wú)菌鑷子把滅菌長(zhǎng)方形紙片貼于平板表面中央。打開(kāi)平皿蓋的2/3，置

6、于紫外燈下距離約20-30厘米處照射30分鐘，除去紙片，蓋好平皿蓋，置37度溫箱培養(yǎng)24小時(shí)觀察結(jié)果。原理：損傷DNA，阻止DNA的復(fù)制,4.常用消毒滅菌器及除菌濾器介紹,高壓蒸汽滅菌器 干烤箱（干熱滅菌器） 濾器,三、藥物敏感實(shí)驗(yàn)（紙片法）,方法：1. 取瓊脂平板一個(gè)用記號(hào)筆在平板底部標(biāo)記貼抗生素紙片的位置。 2. 點(diǎn)燃酒精燈。用棉簽蘸取菌液，在瓊脂平板上密集而均勻地涂布。 3. 待培養(yǎng)基稍干后，無(wú)菌操作用鑷子分別取抗生

7、素紙片按標(biāo)記位置貼在涂布細(xì)菌的培養(yǎng)基表面，各紙片距離大致相等。紙片放置后不要再挪動(dòng)，因挪動(dòng)將影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 4.把平板倒放在 37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng) 18～24 小時(shí)后取出觀察結(jié)果，測(cè)定抑菌環(huán)的大小。,三、藥物敏感實(shí)驗(yàn)（紙片法）,抑菌環(huán)的形成：瓊脂平板內(nèi)含有大量的水分，紙片上的藥物具有水溶性。因此可逐漸擴(kuò)散到周?chē)呐囵B(yǎng)基中，其濃度將隨與紙片距離的增加而逐漸降低，從而形成了以紙片為中心，藥物濃度逐漸減小的濃度剃度。當(dāng)藥物濃度降低到某一程度時(shí)，

8、細(xì)菌足以抵抗其抑菌殺菌作用；在此范圍以外，細(xì)菌將正常生長(zhǎng)，而在此范圍以?xún)?nèi)則無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。以此界線(xiàn)為邊緣所形成的抑菌殺菌的區(qū)域稱(chēng)為抑菌環(huán)。,三、藥物敏感實(shí)驗(yàn)（紙片法）,測(cè)量抑菌環(huán)的大小，初步判定并比較細(xì)菌對(duì)不同藥物的敏感情況，判斷藥物的敏感度，一般以敏感、中度敏感、耐藥三個(gè)等級(jí)報(bào)告結(jié)果。,藥 敏 實(shí) 驗(yàn),材料：瓊脂平板、細(xì)菌培養(yǎng)物、藥敏紙片 方法：1. 挑取少量細(xì)菌培養(yǎng)物密集劃線(xiàn)； 2. 夾取青霉素及慶大霉素藥敏片各一片，