細胞培養(yǎng) - 生命經緯－關注生命科學及醫(yī)學研究

1、細胞培養(yǎng),司徒鎮(zhèn)強 2003- 4,細胞培養(yǎng)的優(yōu)點,1.活細胞：能長時間、直接觀察、研究 活細胞的形態(tài)、結構、生命活動,2.可控制：可控制-選擇對象：均一性、重復性 哪一種：類型：上皮？間質？-- 性質：正常？腫瘤？-- 階段：可控制-調節(jié)條件：

2、各種因素 物理、化學、生物等因素,可控制-利用方法： 采用各種研究技術、記錄方法： 研究：倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、 電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦 顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、 同位素標記-- 記錄：攝影照片、縮時電影、電視--,優(yōu)點3.應用廣： 學科多

3、： 對象廣： 各種動物：低等動物--高等動物--人類 一種動物：不同年齡-- 不同組織-- 正?；虍惓＃[瘤--）,4.較經濟：可提供大量、同時、重復性好的、 生物學性狀相似的實驗對象,細胞培養(yǎng)的缺點,現人工模擬體內環(huán)境的技術已經很高, 但, 人工所模擬的條件與體內實際情況 仍不完全相同. 當細胞被置于體外培養(yǎng)后, 生活在缺乏動態(tài)平衡的環(huán)境中

4、, 久了，必然發(fā)生變化.,1.與體內主要不同 相對孤立、相對單一 缺乏體內的系統作用、失去神經體液的調節(jié) 和細胞相互間的影響,2.主要表現 失去原有組織結構和細胞形態(tài) 分化減弱或不顯 細胞趨向單一化； 3.提示 要正確認識體外培養(yǎng)細胞 是一種特定條件下生長的細胞群體。,生長類型,體外細胞培養(yǎng)物的生長類型,按生長方式:2型 粘附型細胞:附著在某一固相支持物

5、表面才 能生長的細胞。 懸浮型細胞:不必附著于固相支持物表面，而 在懸浮狀態(tài)下即可生長的細胞。 絕大多數有機體細胞屬粘附型細胞， 只有少數細胞類型如某些腫瘤細胞和白細胞 可在懸浮狀態(tài)下生長,貼附(粘附)型細胞,粘附:是大多數有機體細胞在體內 生存和生長發(fā)育的基本存在方式含義 兩方面結果 基于粘附特性，使細胞與細胞之間相互結合形成組織，

6、 有機體的絕大多數細胞必須 粘附于一固相表面 才能生存和生長。,培養(yǎng)時：這些細胞被放到體外環(huán)境中以后,同樣需要粘附于某一固相表面才能生存和生長，因而屬于粘附型細胞。粘附(錨定或錨著)依賴型(性)細胞：唯有粘附于固相表面才能生存的細胞,類型 細胞在體內、外的粘附方式：存在差異 體內：粘附是全方位 外形具有復雜的立體特征 體外：多數情況，細胞

7、只有一個附著平面 外形一般與體內時明顯不同 按照培養(yǎng)細胞的主要形態(tài)，可分為幾大類型,分類 根據形態(tài)大致的不同，主要2類： 上皮樣 成纖維細胞樣 其它，不定型,上皮樣細胞型,名稱：僅形態(tài)上似體內，實際上不完全等于--來源：來源于外胚層，內胚層細胞 如：皮膚及其衍生物 消化道，乳腺，

8、肺泡 上皮性腫瘤形態(tài)：類似體內的上皮細胞 扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核,生長特點 易相連成片 相靠—緊密相連—成薄層—鋪石狀 生長時呈膜狀移動 很少脫離細胞群而單個活動,成纖維細胞樣細胞,名稱：凡在培養(yǎng)中形態(tài)與成纖維細胞類似的來源：由中胚層間充質組織起源的組織 如：真正的成纖維細胞

9、 心肌，平滑肌，成骨細胞，血管內皮形態(tài)：似體內成纖維細胞的形態(tài) 胞體梭形或不規(guī)則三角形 胞質向外伸出2—3個長短不等的突起 中有卵圓形核,生長特點 排列成放射狀，漩渦狀 并不緊靠連成片， 細胞—細胞接觸易斷開而 單獨行動 游離的單獨的成纖維樣細胞， 常有幾個伸長

10、的細胞突起,貼附生長型--類型,1. 與體內同名的細胞不完全相同 如：形態(tài)相似的成纖維細胞，可不同來源 自同一動物不同組織的成纖維樣細胞相似但 發(fā)展趨向不同2. 培養(yǎng)細胞的形態(tài)不穩(wěn)定 條件改變，細胞形態(tài)可有變化,培養(yǎng)細胞形態(tài)不穩(wěn)定血清 Hela 高血清 低血清

11、 成纖維細胞樣 上皮樣細胞 pH Hela 太酸或太堿 標準pH 成纖維細胞樣 上皮樣細胞 細胞密度 3T3 低密度 高密度 成纖維細胞樣 上皮樣細胞 生長狀態(tài)改變 懸浮或貼附 懸浮

12、 貼附 圓形 成纖維或上皮樣 轉化與否 未轉化 轉化后 成纖維樣 可成上皮樣,懸浮生長型,概念 培養(yǎng)時不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長 或以機械方法使保持懸浮狀態(tài)下生