終點顯色法試劑盒的臨床應用

1、新北診斷試劑盒（內毒素、真菌（1-3）-β-D-葡聚糖檢測試劑盒）終點顯色法臨床運用,1,目錄,2,3,企業(yè)簡介鱟試劑介紹及臨床上的運用 細菌內毒素試劑盒 真菌檢測試劑盒產品優(yōu)勢 與臨床現(xiàn)有試劑盒方法比較 檢測方法分類及第四代顯色基質法意義,1.基本情況： 1）福州新北生化工業(yè)有限公司創(chuàng)立于1995年，由留學歸國學者丁友玲創(chuàng)辦； 2）公司為生產鱟試劑及其配套產品的高新技術企業(yè)。

2、 3）現(xiàn)公司占有3500平方米清潔廠房（1000平方米為局部百級，整體萬級），擁有年產1000萬人份的臨床檢測試劑盒與5000萬支鱟試劑的生產流水線 4）公司于2015年取得福建省醫(yī)療器械生產許可證及藥品生產許可證；,一、企業(yè)簡介,丁友玲女董事與J·Levin教授,丁友玲董事日本留學與導師照,丁友玲董事與田中重則,田中重則，日本生化工業(yè)株式會社首席研究官，終點顯色法試劑盒產品首創(chuàng)者,巖永貞昭（左邊），日本鱟

3、血研究世界權威，顯色基質理論的發(fā)明者,J·Levin教授于1965年發(fā)明鱟試劑用于檢測細菌內毒素,總經理,市場部,后勤保證部,研發(fā)部,生產部,品保部,2.公司架構,細胞離心設備,冷凍干燥器,工人正在操作封口機,生產區(qū)域潔凈區(qū)走廊,3、公司核心競爭力及歷年榮譽,公司取得的5項國家發(fā)明專利及15項實用新型專利： 1）抗干擾鱟試劑的制備工藝 （專利號：2003101057615） 2） 隧道式干熱滅菌設備測試試用內毒素

4、指示劑的制備方法 （專利號：ZL 2005102000276） 3）一種臨床檢測試劑的制備方法 （專利號：ZL 2005102000280) 4）(1-3)-β-D-葡聚糖的精制方法（專利號：ZL 2012100760693) 5）一種除液體中熱源的凝膠及其制備方法和應用 （專利號：ZL 201410457

5、5879）,,2004年以來公司被評為福建省高新技術企業(yè)； 2006~2008年主要獎勵：福建省科技進步三等獎； 第十六屆全國發(fā)明展覽會銀獎； 海峽兩岸職工創(chuàng)新成果金獎 ；福州市科技進步一等獎、二等獎；福建省巾幗發(fā)明專利獎等； 2015年建立省級院士專家工作站； 2015年取得醫(yī)療器械生產許可證及體外診斷試劑的注冊證； 第四代細菌內毒素檢測試劑盒、真菌（1-3）-β-D葡

6、聚糖檢測試劑盒（終點顯色法）為國內首創(chuàng)；,二、鱟試劑簡介,中國鱟 (Tachypleus tridentatus )海洋節(jié)肢動物；俗稱: 鴛鴦魚,夫妻魚,馬蹄蟹。,主要原料是鱟血細胞中的變形細胞；鱟試劑是變形細胞中提取的蛋白酶凍干制品；,鱟血遇氧變藍,1885年美國的W.H.Howell發(fā)表了一篇有關鱟血的化學組成和凝集方面的研究成果，可以說是鱟試劑研究的開端。1956年美國科學家Bang和Levin發(fā)現(xiàn)美洲鱟血液加入革蘭氏陰性菌時

7、會產生凝膠。1964年Levin和Bang提出了鱟血凝集的初步機理。（Levin是我司的顧問）1968年正式建立了鱟試驗方法；1980年被美國藥典采納代替兔法檢測藥品中細菌內毒素。1979 年福建省藥品檢驗所丁友玲（現(xiàn)任我司董事長）、劉端華首先在國內研制成功鱟試劑。82年中試成功，獲衛(wèi)生部重大成果甲級獎。80年代日本生化工業(yè)株式會社與和光純藥株式會社將鱟試劑制備成試劑盒，應用于臨床檢測人血液中的內毒素。,,鱟試驗法的確立,鱟

8、試劑在臨床檢測上的應用,（終點顯色基質法）,一、細菌內毒素試劑盒臨床運用二、真菌檢測試劑盒臨床運用,一、細菌內毒素檢測試劑盒在臨床的應用,,1.細菌內毒素概念： a.革蘭氏陰性菌細胞壁的主要成分脂多糖（LPS）， 也就是細菌內毒素； b.大多數致病原細菌為革蘭氏陰性細菌。本法能快 速檢測血液中細菌內毒素在臨床上具有重大意義；2.檢測的目標：人體血液中的細菌內毒素3.檢測的樣品：人體的血

9、清或血漿。其中血清為主要對象。,脂,4.臨床檢測內毒素的意義,全國每年臨床感染患者2億人次（表現(xiàn)為：革蘭氏陰性菌、真菌、陽性菌、病毒等感染），其中以革蘭氏陰性菌感染占了很大比例。 以往診斷這類疾病主要采用方法為細菌培養(yǎng)法，但細菌培養(yǎng)法所需時間長（24h以上）且病人服用抗生素有一定程度抑制作用，結果常常呈陰性（細菌內毒素血癥患者血液檢測不到細菌），使臨床無法確切診斷。,我司應用細菌內毒素特異性試劑盒可以簡便、快速測定血液中的細菌

10、內毒素含量是否超過臨床限值，其檢測結果可以為臨床診斷提供重要依據。,5.醫(yī)院臨床檢測適用科室及范圍,適用范圍： 1）各種系統(tǒng)感染疾病 2）細菌性感染疾病 3）原因不明的發(fā)熱適用科室： ICU病房 急診科 感染科 兒科燒傷科、呼吸內科、血液內科、腎內科、內分泌科、腫瘤科、普外科、胸外科、移植科、婦產科,6.臨床血清內毒素限值：≤0.03Eu/mL

11、,7.血清保存條件：在2~8℃中，可保存72h。,二、真菌（1-3）-β-D-葡聚糖檢測試劑盒臨床運用,1.（1-3）-β-D葡聚糖概念： a.存在真菌的細胞壁中，是真菌特有的結構之一 b.真菌類中致病菌主要為：念珠菌、曲霉菌（毛霉菌、隱球菌、接合菌）等真菌；2.檢測的樣品：人體的血清、血漿，其中血清主要對象3.檢測的目標：人體血液中的（1-3）-β-D葡聚糖,4.臨床檢測真菌的意義,a.目前真菌感染的普遍性

12、 近年來，由于造血干細胞移植、器官移植的廣泛開展，高強度免疫抑制劑，大劑量化療藥物及廣譜抗生素的長期應用，使臨床患者體內菌群失調，產生深部真菌感染的發(fā)病率呈上升趨勢。引起不明發(fā)熱或長期低燒不退，常常被誤診為臨床耐藥性。b.目前真菌感染診斷的方法 1）細胞培養(yǎng)法（7至10天），臨床意義不大 2）活體取菌（患者痛苦難接受、漏檢率高）本司真菌快速診斷試劑盒： 1）快速檢測（1小時） 2）可微量檢測

13、至10pg/ml（臨床限值為20pg/ml） 3）特異性強，只與（1-3）-β-D葡聚糖反應,5.醫(yī)院臨床檢測適用科室及范圍,適用范圍： 1）各種系統(tǒng)感染疾病 2）深部真菌性感染疾病 3）原因不明的發(fā)熱 4）長期適用抗生素，但仍為低熱體征者適用科室： ICU病房 急診科 感染科 燒傷科 兒科呼吸內科、血液內科、腎內科、內分泌科、腫瘤科、普外科、胸外科、移植科、風濕免疫

14、科、婦產科,6.臨床血清中真菌多糖限值： 1） ≤20pg/mL，基本判為無深部真菌感染（10~20pg/ml之間作為真菌感染觀察期）； 2） ≥20pg/mL，疑似真菌感染，建議結合臨床癥狀進行判斷及治療。,7.血清保存條件：在2~8℃中，可保存72h。,三、細菌內毒素、真菌檢測試劑盒與C-反應蛋白的檢測試劑盒及降鈣素試劑盒的比較,試劑盒的比較,真菌（1-3）β-D葡聚糖檢測試劑盒注冊證,細菌內毒素檢測試劑盒注冊證,醫(yī)療

15、器械生產許可證,四、鱟試劑檢測方法分類及第四代顯色基質法的意義,鱟試劑檢測方法分類,1、凝膠法鱟試劑（半定量） 第一代2、動態(tài)濁度法鱟試劑（定量） 第二代3、顯色基質動態(tài)濁度法鱟試劑（定量） 第三代4、顯色基質終點顯色法鱟試劑（定量） 第四代,全國首創(chuàng),細菌內毒素、真菌（1-3）β-D葡聚糖試劑盒（終點顯色法）的優(yōu)勢：,a.快速，反應時間1h；b.穩(wěn)定性好:試劑反應體

16、系加入偶氮化試劑終止反應后檢測，穩(wěn)定性、重現(xiàn)性均好；c.抗干擾能力強：由于偶氮化反應顯玫紅色，于波長 545nm 測定，克服血清 中濁度和顏色干擾。d.靈敏度高：可檢測血清中細菌內毒素達 0.005 Eu/ml 以上； 可檢測血清中真菌（1-3）β-D葡聚糖達 5 pg/ml以上；e.臨床符合率高，可達98%；f.堿試劑法處理血清對脂血，溶血，黃疸樣本，渾濁樣本具有一定的屏蔽作用

17、。,細菌內毒素（lps） 真菌（1-3）β-D葡聚糖 C因子 C因子 G因子 G因子 B因子 B因子 凝固酶原 凝固酶 凝固酶原 boc-leu-gly-arg——pNA（對硝基苯胺）

18、 pNA A=405nm測定（淡黃色） boc-leu-gly-arg- （游離） A=545nm測定（玫紅色）,,,,