葉綠體色素的提取

1、葉綠體色素的提取、分離、定量及理化性質(zhì)的鑒定葉綠體色素的提取、分離、定量及理化性質(zhì)的鑒定【實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康摹?.掌握提取和分離葉綠體色素的方法；2.掌握測(cè)定葉綠體色素含量的方法；3.熟悉葉綠體色素的理化性質(zhì)及吸光特性；4.了解植物葉綠體色素組成及其與生境的相關(guān)性?！緦?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理】1.葉綠體色素是植物進(jìn)行光合作用的重要物質(zhì)，葉綠體色素包含綠色素（包括葉綠素a和葉綠素b）和黃色素（包括胡蘿卜素和葉黃素）兩大類，這兩類色素都不溶于水，而溶

2、于有機(jī)溶劑，故可用乙醇或丙酮等有機(jī)溶劑提取。提取液可用色層分析的原理加以分離。因吸附劑對(duì)不同物質(zhì)的吸附力不同，當(dāng)用適當(dāng)?shù)娜軇┩苿?dòng)時(shí)，混合物中各成分在兩相（流動(dòng)相和固定相）間具有不同的分配系數(shù)，所以它們的移動(dòng)速度不同，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間層析后，便將混合色素分離。2.葉綠素是一種二羧酸——葉綠酸與甲醇和葉綠醇形成的復(fù)雜酯，故可與堿起皂化反應(yīng)而生成醇（甲醇和葉綠醇）和葉綠酸的鹽，產(chǎn)生的鹽能溶于水中，可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開(kāi)圖一：葉綠素的結(jié)構(gòu)

3、3.葉綠素與類胡蘿卜素都具有光學(xué)活性，葉綠素吸收光量子而轉(zhuǎn)變成激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)的葉綠素分子很不穩(wěn)定，當(dāng)它變回到基態(tài)時(shí)可發(fā)射出紅光量子，因而產(chǎn)生熒光。，測(cè)定吸收光譜（400nm700nm），測(cè)定663、645nm處的吸光值，根據(jù)公式計(jì)算葉綠素a、葉綠素b的含量。2.葉綠體色素的分離：取圓形定性濾紙一張，用毛細(xì)管吸取葉綠體色素提取滴在圓形濾紙中心，使色素?cái)U(kuò)散的寬度限制在0.5cm以內(nèi)，保證葉綠素?cái)U(kuò)展速度均勻保證色素?cái)U(kuò)展清晰風(fēng)干后，應(yīng)多點(diǎn)樣幾次

4、大約20次左右.在圓形濾紙中心戳一圓形小孔（直徑約3mm），將紙捻一端插入圓形濾紙的小孔中，使與濾紙剛剛平齊（勿突出）。長(zhǎng)形濾紙一條，也點(diǎn)樣后層析分離（用于測(cè)定吸收光譜）培養(yǎng)皿中加入適量的四氯化碳，把帶有紙捻的圓形濾紙平放在培養(yǎng)皿上，使紙捻下端浸入推動(dòng)劑中。迅速蓋好培養(yǎng)皿。此時(shí)，推動(dòng)劑借毛細(xì)管引力順紙捻擴(kuò)散至圓形濾紙上，并把葉綠體色素向四周推動(dòng)，不久即可看到各種色素的同心圓環(huán)。所用培養(yǎng)皿底、蓋直徑應(yīng)相同，且應(yīng)略小于濾紙直徑，以便將濾紙架

5、在培養(yǎng)皿邊緣上。長(zhǎng)形濾紙放入盛有四氯化碳大試管中，進(jìn)行層析后獲得線形不同色素條帶，分別剪下后測(cè)定吸收光譜。葉綠素的理化性質(zhì)部分葉綠素的理化性質(zhì)部分3熒光現(xiàn)象的觀察用反射光和透射光觀察提取液的顏色有何不同，反射光下觀察到的提取液顏色即為葉綠素產(chǎn)生的熒光顏色。4光對(duì)葉綠素的破壞作用：取葉綠體色素提取液少許，分裝兩支試管中，一支放在黑暗處（或用黑紙?zhí)装硪恢Х旁趶?qiáng)光下（陽(yáng)光下），經(jīng)過(guò)23h后，觀察兩支試管中溶液的顏色有何不同。5.銅代反

6、應(yīng)：取色素提取液少許于試管中，一滴一滴加濃鹽酸，直至溶液顏色出現(xiàn)褐綠色，此時(shí)葉綠素分子已遭破壞，形成去鎂葉綠素。然后加醋酸銅晶體少許，慢慢加熱溶液，則又產(chǎn)生鮮亮的綠色。此即形成了銅代葉綠素。6.皂化反應(yīng)：取葉綠體色素提取液2mL于大試管中，加入4mL乙醚，搖勻，再沿試管壁慢慢加人3mL蒸餾水，輕輕混勻，靜置片刻，溶液即分為兩層，色素已全部轉(zhuǎn)入上層乙醚中。用滴管吸取上層綠色層溶液，放入另一試管中。加入30％KOH－甲醇溶液，充分搖勻，再加

7、入蒸餾水約35mL，搖勻靜置?？梢钥吹饺芤褐饾u分為兩層上層是黃色素，下層是綠色素?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果】1.各吸收光譜的測(cè)定總光和色素波長(zhǎng)（nm）第一次第二次第三次平均色素1色素2色素3色素44000.4640.4060.4710.4470.0400.0530.5340.2244100.5660.4960.5620.5410.0430.0630.6440.0234200.6330.5600.6270.6070.0470.0660.6670