糖化酶的固定化

1、19糖化酶的固定化及其在葡萄糖生產中的應用工藝糖化酶的固定化及其在葡萄糖生產中的應用工藝姓名：吳啟華12生物工程1班學號：1214200027指導老師：柯德森、姚焱；同組者：嚴少杰，李海毅；時間:2015113020151214摘要：摘要：利用有關固定化酶的理論和方法，研究固定化糖化酶的效率與糖化酶的濃度的關系。本實驗中測定固定化糖化酶偶聯率、相對活力、活力回收來衡量其生產工藝的優(yōu)劣，并探討糖化酶的濃度對固定化效果及結合牢固程度的影響和

2、驗證固定化糖化酶催化生產葡萄糖的重復使用能力及其效率。制備固定化糖化酶的方法為離子吸附法，并且使用DNS法測定固定化酶的活力。結果顯示：在該次實驗中，固定化的效果較好；加入20g離子交換劑固定化酶的活力回收為79.1%，偶聯率為90.46%，相對活力為82.58%，加入25g離子交換劑固定化酶的活力回收為85.2%，偶聯率為92.76%，相對活力為92.54%。重復使用葡萄糖固定化酶的過程中，固定化酶的利用效率降低。酶與載體的濃度比例較

3、高固定化酶葡萄糖生產效率高。關鍵詞：關鍵詞：固定化，糖化酶，葡萄糖，酶活力1、前言：、前言：糖化酶也稱葡萄糖淀粉酶（glucoamylaseEC.3.2.1.3）(淀粉α1，4葡聚糖葡萄糖水解酶)，它能夠催化淀粉液化產物糊精及低聚糖進一步水解成葡萄糖。糖化酶對底物的作用是由非還原端開始，將α1，4鍵和α1，6鍵逐一水解，酶作用時糖苷鍵在C16間斷裂，所產生的葡萄糖為?構型，幾乎100%轉變?yōu)槠咸烟?。工業(yè)生產使用的糖化酶主要來自曲霉、根霉

4、及擬內孢霉，它被廣泛應用于釀酒、制糖等行業(yè)，是非常重要的酶制劑。酶的固定化方法通常按照用于結合的化學反應的類型進行分類，大致有三種：非共價結合法（結晶法、分散法、物理吸附法及離子結合法）；化學結合法（包括共價結合法及交聯法）；包埋法（包括微囊法及網絡法）。本實驗利用離子結合法制備固定化糖化酶。離子結合法就是酶通過離子鍵結合于具有離子交換基的不溶性載體的固定化方法，常用的載體有：葡聚糖凝膠、離子交換樹脂、纖維素等。本實驗以離子交換樹脂為載

5、體，應用離子交換結合法制備固定化酶，該法操作簡便，處理條件溫和，酶的高級結構和活性中心的氨基酸殘基不易被破壞，酶的活性回收率高，可反復連續(xù)生產，對稀酶有濃縮作用，載體可再生使用。其缺點是：載體和酶的結合力弱，容易受緩沖液種類或pH的影響，在高離子強度下進行反應時，酶易從載體上脫落。使用共價結合法不會使酶容易脫落，國外研究者已研究出用氧化鋯涂層多孔玻璃或多孔陶瓷，然后硅烷化，最后用重氮基、醛基和異硫氰基衍生物偶聯糖化酶，結果使酶活較高，并

6、且能連續(xù)生產3個酶半衰期。在此次實驗中還使用用DNS法測定固定化酶、殘留酶、原酶的活力。2、材料與方法：、材料與方法：2.12.1材料材料：（1）糖化酶液，GF201大孔強堿陰離子交換劑，葡萄糖，可溶性淀粉39酶的固定化：100ml糖化酶液倒入貯液槽中，加入預處理的離子交換劑20g和25g，不斷輕輕攪拌，開始進行酶的固定化，30min后過濾去未固定的酶液，測量固定化酶及反應后殘留酶液活性。2.4.3葡萄糖標準曲線的制作葡萄糖標準曲線的制

7、作取7支干凈的具塞刻度試管（可用封口膠代替），編號，按表1加入試劑：表1葡萄糖標準曲線制作管號試劑1234567葡萄糖標準液（mL）00.20.61.01.41.82.0蒸餾水（mL）2.01.81.41.00.60.20葡萄糖含量（mg）00.20.61.01.41.82.035二硝基水楊酸（mL）2.02.02.02.02.02.02.0搖勻，置沸水浴中煮沸5min。取出后流水冷卻，加蒸餾水定容至20mL。以1號管作為空白調零點，在

8、540nm波長下比色測定光密度。以葡萄糖含量為橫坐標，光密度為縱坐標，繪制標準曲線。2.4.4酶活力的測定：取酶活力的測定：取6支干凈的試管，編號，按表支干凈的試管，編號，按表2進行操作。進行操作。表2酶活力測定取樣表操作項目淀粉酶活力測定固定化酶活力測量1%淀粉溶液（mL）1.01.01.01.01.01.0預保溫將各試管和淀粉溶液置于40℃恒溫水浴中保溫10min淀粉酶原液0.1mL0.1mL0.1mL0.2g0.2g0.2g（1，