血吸蟲(chóng)病的糞便檢查

1、血吸蟲(chóng)病的糞便檢查血吸蟲(chóng)病的糞便檢查血吸蟲(chóng)病的診斷，一般可分為臨床診斷和實(shí)驗(yàn)診斷。臨床診斷是根據(jù)病史、癥狀和體征作出初步診斷，但不能確診病人。實(shí)驗(yàn)診斷包括病原學(xué)診斷和免疫學(xué)診斷。血吸蟲(chóng)病的病原學(xué)診斷有糞便檢查和活組織檢查兩種，若在受檢者的糞便或活組織中查見(jiàn)蟲(chóng)卵或毛蚴，即可診斷為血吸蟲(chóng)病人。血吸蟲(chóng)病的糞便檢查有鏡檢法檢查蟲(chóng)卵，孵化法檢查毛蚴，也有孵化結(jié)合沉渣鏡檢。由于孵化法取用的糞便量多，在糞內(nèi)只要有少數(shù)活蟲(chóng)卵就能查見(jiàn)，檢出率比較高。孵化

2、后的沉渣鏡檢，能檢出部分孵化檢漏的病人，能進(jìn)一步提高檢出率，孵化結(jié)合鏡檢是目前血吸蟲(chóng)病糞便檢查的主要方法。一、病原學(xué)診斷的理論基礎(chǔ)寄生在血管里的血吸蟲(chóng)為何能在糞便中查到蟲(chóng)卵先從血吸蟲(chóng)產(chǎn)卵及蟲(chóng)卵分布講起。雌雄合抱的成蟲(chóng)寄生在人或哺乳動(dòng)物的腸系膜靜脈內(nèi)產(chǎn)卵，雌蟲(chóng)在寄生期間的排卵能力可有變化。如小鼠感染日本血吸蟲(chóng)（大陸株）后26～33d，每條雌蟲(chóng)日平均產(chǎn)卵150個(gè)，34d為664個(gè)，44d為時(shí)達(dá)2092個(gè)，58d為929個(gè)，68d為370個(gè)卵

3、。雌蟲(chóng)產(chǎn)出的蟲(chóng)卵大部分沉積在腸和肝等組織，僅小部分卵可隨糞便排出體外。如小鼠感染大陸株日本血吸蟲(chóng)44d產(chǎn)卵最多時(shí)（2092個(gè)日）分布于大腸、肝、小腸、自糞便排出和其它組織蟲(chóng)卵的比例為50.5%、22.5%、18.3%、7.7%及1%。又如用山梨株日本血吸蟲(chóng)尾蚴感染ddy小鼠4～15wk觀察，平均每條雌蟲(chóng)每天產(chǎn)卵2100個(gè)。到15wk時(shí)，從糞便排出的累計(jì)蟲(chóng)卵數(shù)占總產(chǎn)卵的28.2%；組織內(nèi)蟲(chóng)卵以小腸為主，占沉積蟲(chóng)卵數(shù)83.2%，而肝內(nèi)為15

4、.5%。表明，同一種血吸蟲(chóng)的不同地域株和不同宿主，雌蟲(chóng)產(chǎn)出的蟲(chóng)卵在組織內(nèi)的分布及排出體外的數(shù)量不盡相同。剛從雌蟲(chóng)產(chǎn)出的蟲(chóng)卵為單細(xì)胞卵，含1個(gè)受精卵和20個(gè)（16～30個(gè)）卵黃細(xì)胞，在組織內(nèi)經(jīng)10～11d發(fā)育成熟（含毛蚴卵），成熟卵在組織內(nèi)成活時(shí)間約為11d。因此，日本血吸蟲(chóng)卵自產(chǎn)出、發(fā)育成熟到死亡約經(jīng)21～22d。血吸蟲(chóng)卵從血管中通過(guò)腸壁（日本、曼氏血吸蟲(chóng)）或膀胱（埃及血吸蟲(chóng)）等組織釋放到腸腔或膀胱腔中，然后隨糞便或尿液排出，我們即可取

5、糞便或尿液作病原學(xué)檢查。但其機(jī)理尚未很好了解，一般認(rèn)為涉及很多因素：蟲(chóng)卵的刺、血流的壓力、腸蠕動(dòng)以及毛蚴分泌的蛋白質(zhì)酶等。其實(shí)，首要的應(yīng)是隨著蟲(chóng)卵中毛蚴的發(fā)育成熟，在蟲(chóng)卵周?chē)纬刹∽?，這是必要條件。所以排至外界的蟲(chóng)卵大多是含活動(dòng)毛蚴的成熟卵。成熟卵在合適的條件下可脫殼而出。因此，從糞便內(nèi)檢查毛蚴，即毛蚴孵化法為日本血吸蟲(chóng)特有的診斷技術(shù)。二、尼龍絹袋集卵孵化法曾采用的孵化法有量杯燒瓶沉淀孵化法、塑料杯頂管孵化法、尼龍絹袋集卵孵化法等。尼龍

6、絹袋集卵孵化法有下列優(yōu)點(diǎn)：（1）毛蚴計(jì)數(shù)高；（2）用水量少，可減少勞動(dòng)力；（3）由于不需換水，可縮短操作時(shí)間，2—3min即可入瓶孵化；（4）器材輕巧，攜帶方便。為此，我們確定采用尼龍絹袋集卵孵化法。（一）毛蚴孵化的條件成熟的血吸蟲(chóng)卵有機(jī)會(huì)落入自然界水體中，條件適合時(shí)，卵內(nèi)毛蚴活動(dòng)增強(qiáng)，在卵內(nèi)不停地轉(zhuǎn)動(dòng)，最終破殼而出，在水體中游動(dòng)，這一過(guò)程稱孵化。毛蚴從卵內(nèi)逸出的時(shí)間非常迅速，僅0.1～0.3s。日本血吸蟲(chóng)卵孵化時(shí)卵殼大多數(shù)呈縱裂，毛蚴

7、迅速?gòu)目v向裂口逸出。1、滲透壓一般認(rèn)為介質(zhì)的低滲透壓作用是血吸蟲(chóng)卵孵化的主要因素。成熟血吸蟲(chóng)卵在血液、腸內(nèi)容物或尿液中是不能孵化的，僅被淡水稀釋之后才能孵出毛蚴。糞便中的日本血吸蟲(chóng)卵需待糞液被稀釋至一定混濁度以下始能孵化。研究證明，在0.7～0.9%氯化鈉溶液中，大多數(shù)日本血吸蟲(chóng)卵的孵化被抑制，1.2%及其以上濃度全部蟲(chóng)卵不能孵化。0.8%氯化鈉溶液的滲透壓相當(dāng)于4.0大氣壓（表1）。表1日本血吸蟲(chóng)卵在氯化鈉溶液中一天的孵化力（溫度日本

8、血吸蟲(chóng)卵在氯化鈉溶液中一天的孵化力（溫度20℃）氯化鈉溶液濃度（%）未孵化蟲(chóng)卵數(shù)孵化蟲(chóng)卵數(shù)孵化率（%）滲透壓（大氣壓）1.08433.44.10.88711.13.30.6762020.82.50.4344557.01.70.2304660.50.8對(duì)照1911685.9—（okamoto，1962）若以清水中的蟲(chóng)卵孵化率為100%，而在0.2%氯化鈉溶液中蟲(chóng)卵的孵化率不減，在0.5%溶液中孵化率降為60%，在0.8%中降至7.5%，在

9、1.0%中降至1.8%，未孵出毛蚴的蟲(chóng)卵在當(dāng)時(shí)看來(lái)還是活的。2、溫度溫度是促使毛蚴孵化的必要條件，25℃左右是血吸蟲(chóng)毛蚴孵化的適宜溫度，低于10℃或高于37℃，大多數(shù)蟲(chóng)卵的孵化受抑制。一般是溫度愈高，孵化愈快，毛蚴壽命也愈短（表2）雖然日本血吸蟲(chóng)卵在pH3.0～8.6范圍內(nèi)可以孵化，但最適宜于孵化的pH為7.4～8.6范圍。酸性愈高愈不利于孵化，pH2.8已完全抑制蟲(chóng)卵的孵化。另一方面，堿性愈高也有害于蟲(chóng)卵孵化，在pH10以上時(shí)，蟲(chóng)卵孵

10、化已完全被抑制。（二）毛蚴的行為1、游動(dòng)毛蚴體表具有21（或22）個(gè)扁平的纖毛上皮細(xì)胞，每個(gè)纖毛上皮細(xì)胞生長(zhǎng)有無(wú)數(shù)根纖毛，每根纖毛長(zhǎng)4—5μm。它們的煽動(dòng)能使毛蚴在水中很快地游動(dòng)并旋轉(zhuǎn)前進(jìn)，其游速平均為2.190.20mms，而每秒游動(dòng)方向改變率的中位數(shù)值為540。毛蚴的游速與其時(shí)齡、溫度、光照度有關(guān)。剛孵出的毛蚴游速為2.27mms，1～5h為2.00mms，8h后下降為1.52mms。在溫度為4、12、22及34℃時(shí)，毛蚴的游速分別

11、為0.5、1.4、2.2及3.8mms。光照強(qiáng)度與毛蚴游速呈直線相關(guān)，回歸方程：Y=0.009X1.510，式中：Y為毛蚴游速，X為光照度。毛蚴的活力和壽命與水質(zhì)、水的溫度及pH等因素有密切關(guān)系。在20～25℃時(shí)，日本血吸蟲(chóng)毛蚴一般可活10h以上。pH7.5～8.5時(shí)毛蚴活動(dòng)良好，在pH7～8時(shí)毛蚴一般可活5～6h，pH6或10時(shí)可成活2～3h，pH4～5時(shí)僅成活1～2min。鹽濃度高于或相當(dāng)于0.7%時(shí)，毛蚴成活時(shí)間逐漸減少。鹽濃度為

12、0.157%和0.35%時(shí)，毛蚴成活時(shí)間明顯地較淡水中為長(zhǎng)。2、趨性血吸蟲(chóng)毛蚴對(duì)其周?chē)奈锢硪蛩赝墚a(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)，許多研究者曾觀察了毛蚴的反應(yīng)行為。一般說(shuō)來(lái)，毛蚴的趨性可表現(xiàn)為向光性、向溫性、背地性（向上性）。日本血吸蟲(chóng)毛蚴多趨向弱光（3600～3800Lux），回避強(qiáng)光和黑暗。在15℃時(shí)任何光照度均具有正趨光性，在20℃時(shí)對(duì)2000Lux以下的光照呈正向光，在25℃為500Lux以下，在30℃為50Lux以下為正向光，表明毛蚴的向光

13、性與溫度有關(guān)。日本血吸蟲(chóng)毛蚴的趨溫性反應(yīng)不如趨光性明顯，在14～34℃溫度范圍中選擇14℃的區(qū)域，在7～20℃的溫度范圍中，毛蚴選擇13～15℃的區(qū)域。毛蚴在水層中具有向上性（背地性），不論在黑暗或光亮的環(huán)境中毛蚴均有這一趨性，而且向上性較向光性為強(qiáng)。如在水柱的底部照光，而上部使其黑暗，大多毛蚴仍然集中在水柱的上層。由于毛蚴具有向上性，所以我們觀察毛蚴的位置應(yīng)是三角燒瓶的頸部。（三）器材1、驗(yàn)收登記材料：糞檢花名冊(cè)、標(biāo)簽。2、集卵器材（

14、1）尼龍絹袋：選260目2.5cm尼龍絹袋，其孔徑為49～61μm，使用中經(jīng)熱水反復(fù)浸泡后縮小至44～53μm，而血吸蟲(chóng)卵大小為74～106（平均89）55～80（平均67）μm，故絕大多數(shù)蟲(chóng)卵不會(huì)在沖洗過(guò)程中漏出袋外。袋的上口直徑8～10cm，長(zhǎng)20cm，下口直徑1.5cm。（2）三角燒瓶：500ml或250ml。（3）銅絲篩（40～60目2.5cm）、壓舌木板（或竹快）、塑料夾、塑料漏斗。3、淋水沖洗器材：沖洗操作臺(tái)、鋁茶壺、糞桶。

15、4、觀察毛蚴器材：日光燈、黑板或黑卡紙、吸管、載玻片。5、鏡檢器材：顯微鏡、試管架、10ml試管、載玻片。6、清洗滅卵器材：鋁鍋、煤球爐（或電爐）、大木盆（或塑料盆）、瓶刷、肥皂、肥皂粉、毛巾等。（四）操作技術(shù)1、驗(yàn)收登記驗(yàn)看糞便的質(zhì)量、數(shù)量及標(biāo)簽。核對(duì)送檢名單無(wú)誤后，重寫(xiě)省糞檢標(biāo)簽3張，統(tǒng)一編號(hào)，然后在省糞檢花名冊(cè)上登記，棄去原標(biāo)簽，將重寫(xiě)的3張標(biāo)簽插入包糞紙中。2、淋水沖洗取3只三角燒瓶，在其頸部各套上一根橡皮筋，取糞包中的3張標(biāo)簽

16、，各折成寬約1cm的長(zhǎng)條，夾在三角燒瓶頸部的橡皮筋中。取漏斗、壓舌板、銅絲篩各一個(gè)，取尼龍絹袋1只，下口用塑料夾夾住。將重約90g的大便分為3等份，先取1份大便置于40～60目25.4mm銅篩中淋水調(diào)漿，通過(guò)漏斗使糞液濾入260目25.4mm的尼龍絹袋中，然后移去銅篩及漏斗，將漏斗水洗后套在三角燒瓶上。繼續(xù)淋水沖洗袋內(nèi)糞渣，用壓舌木版輕輕振蕩尼龍絹袋，使加速過(guò)濾，直至濾出液變清為止。棄去尼龍絹袋下部的塑料夾，將袋內(nèi)的濾渣通過(guò)漏斗淋洗入三