大孔吸附樹脂法研究富集純化荔枝草總黃酮純化工藝研究

1、大孔吸附樹脂法研究富集純化荔枝草總黃酮純化工藝研究程建明，葛婷婷，彭國平，鄭云楓?，葛婷婷（南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇，南京210029）[摘要]：目的研究富集純化荔枝草總黃酮的最適樹脂，確定最佳工藝參數(shù)。方法以總黃酮吸附率、解吸率和純度轉(zhuǎn)移率為評價(jià)指標(biāo)，采用靜態(tài)吸附–解吸附的方法，篩選最佳大孔樹脂型號；以荔枝草中主要黃酮高車前苷濃度為指標(biāo)，確定最大上樣量；以總黃酮含量濃度為指標(biāo)成分，確定最佳洗脫劑濃度；以除雜率、高車前苷轉(zhuǎn)移率和總黃酮

2、轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，評價(jià)其余最優(yōu)工藝。結(jié)果AB8D101樹脂分離效果較好，其最佳吸附工藝為：上樣量為1gmLmL1（生藥量樹脂體積），上樣濃度為0.8gmL，吸附流速1mLmin1；最佳洗脫條件為：用7BV，75%的乙醇溶液洗脫，洗脫流速為6mLmin1，精制后黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)超過80%（以蘆丁計(jì)算）。結(jié)論AB8D101樹脂可有效地對荔枝草總黃酮進(jìn)行富集純化。[關(guān)鍵詞]：荔枝草總黃酮；大孔吸附樹脂；純化工藝StudyontheEnrichment

3、PurificationofTotalFlavonoidsinSalviaplebeiabyMacropousAdsptionResinCHENGJianmingGETingtingPENGGuopingZHENGYunfengGETingting(CollegeofPharmacyNanjingUniversityofChineseMedicine210029NanjingChina)Abstract:Abstract:Objecti

4、veObjectiveToertainthefittesttechnologyicalparametersbystudyingtheapplicationofmacropousresinsusedtopurifyactivecomponentsoftotalflavonoidsinSalviaplebeian.MethodsMethodsToevaluatetheabilityofadsptionredesptionofmacropou

5、sresinsedTthestaticaladsptiondesptionreadsptiondurationswereinvestigatedtotheoptimummacropousresinswiththeadsptionratethedesptionyieldtransferratepurityoftotalflavonoidsasthestard，evaluatingtheabilityofadsptiondesptionof

6、macropousresinswiththeconcentrationofhomoplantagininwhichisthemainflavonoidsofSalviaplebeiaasthestarddeterminethelargestamountofsamplewiththeconcentrationofflavonoidsasthestarddeterminingdeterminetheoptimalelutionagentsc

7、oncentrationwiththeimpurityratehomoplantaginintransferratetheflavonoidstransferrateasthestardevaluatingtherestofoptimumtechnology.ResultsResultsAB8D101wasedfits[第一作者]：程建明，博士，副研究員，主要從事中藥新藥研發(fā)，Tel.:02586798011，Email:cjm7895

8、@[通信作者]：鄭云楓，中藥學(xué)博士，主要從事中藥成分分析研究。Tel.:02586798186，Email:zyunfeng88@.cn[基金項(xiàng)目]：國家自然科學(xué)基金()[通信作者]：程建明鄭云楓，中藥學(xué)博士，主要從事中藥成分分析研究。Tel.:1358520699902586798186，Email:cjm7895zyunfeng88@.comcnCommented[微軟用戶微軟用戶1]:6mLmin2方法與結(jié)果[68]2.1樹脂預(yù)處

9、理[6]方法同參考文獻(xiàn)[6]取適量樹脂，用95%乙醇浸泡24h后，除去樹脂碎片和雜物。濕法裝柱，用95%乙醇洗至流出液與水不產(chǎn)生白色渾濁現(xiàn)象為止，再用蒸餾水洗至無醇味；接著進(jìn)行酸堿處理，即先后用體積分?jǐn)?shù)5%的HCl溶液與質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%的NaOH溶液分別以2BVh流速通過樹脂柱，并靜止置2~4h后，用蒸餾水洗至pH值中性。浸泡于蒸餾水中，備用。2.2上柱液的制備荔枝草藥材加60%乙醇回流提取3次，每次加醇6倍，每次煎煮1小時(shí)，濾過，合并濾液

10、，減壓回收乙醇，至一定體積，加水至一定濃度，靜置過夜，離心得上清液。2.3荔枝草總黃酮含量測定2.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備準(zhǔn)確稱取蘆丁5.43mg，超聲輔助條件下用70%乙醇溶解，定容至25mL，分別精密吸取上述蘆丁乙醇溶液（0.20mgmLgmL）0，0.5，1，2，3，4，5，6mL于8個(gè)25mL容量瓶中，各加70%乙醇至6mL，加入5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，靜置6min，加入10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，靜置6min；加入4%氫氧

11、化鈉溶液10mL，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置15min后，于510nm處測定吸光度A（以不含蘆丁的空白管對照調(diào)零做空白對照）。用最小二乘法線性回歸，得溶液吸光度A與蘆丁質(zhì)量濃度C（mgmLgmL）的回歸方程A=11.884C－0.011，r=0.9987。2.3.2供試品的總黃酮含量測定按照上述方法測定待測液中總黃酮的吸光度A，由回歸方程即可求得質(zhì)量濃度。2.4高車前苷含量測定2.4.1色譜條件色譜柱：HederaODSC18柱

12、（4.6250mm）；λ=335nm；柱溫：T=40℃；流動相：甲醇（A）0.5%冰醋酸（0~15mim:42%~50%A15~20min:50%~90%A20~25min:90%A）；流速：1.0mLminmLmin1；進(jìn)樣量：5μL。2.4.2供試品的高車前苷含量測定按照上述方法測定待測液中高車前苷的峰面積，由外標(biāo)一點(diǎn)法求得高車前苷質(zhì)量濃度。2.45不同型號樹脂的篩選2.45.1靜態(tài)吸附性能比較4種處理好的樹脂抽濾至不滴水為準(zhǔn)，準(zhǔn)確