奧硝唑?qū)π坌源笫笊诚到y(tǒng)的作用機(jī)制研究.pdf

1、奧硝唑（Ornidazole，1-(3-氯-2-羥丙基)-2-甲基-5-硝基咪唑）是繼甲硝唑、替硝唑之后的第三代硝基咪唑類衍生物，具有良好的抗厭氧菌和抗原生質(zhì)（如滴蟲等）感染作用。是臨床上廣泛應(yīng)用于治療男女泌尿生殖道毛滴蟲、賈第蟲感染的常規(guī)藥物，其對(duì)雄性生殖的作用也一直為人們所關(guān)注。1988年McClain RM等人研究證實(shí)：連續(xù)1個(gè)月灌胃給予大鼠400 mg·kg-1劑量的奧硝唑，其附睪尾部的精子活動(dòng)力與對(duì)照組比較有非常明顯的降低。停

2、藥兩周后，精子活動(dòng)力可恢復(fù)。 根據(jù)奧硝唑的抗微生物的作用機(jī)理，其進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后，分子結(jié)構(gòu)中的硝基被體內(nèi)的硝基還原酶還原而產(chǎn)生一個(gè)短壽命的自由基，該自由基具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒作用，從而導(dǎo)致精子結(jié)構(gòu)受損，引發(fā)動(dòng)物生殖功能的降低。本課題擬通過連續(xù)觀察測(cè)定藥物在靶器官和影響精子發(fā)育成熟相關(guān)物質(zhì)的濃度變化，平行進(jìn)行精子膜完整性的實(shí)驗(yàn)觀察，深入了解奧硝唑影響雄性大鼠精子功能的作用機(jī)制。尋求建立動(dòng)物弱精子癥病理模型直觀的評(píng)價(jià)指標(biāo)，探尋男性抗生育藥

3、物新的作用途徑。 第一部分為奧硝唑?qū)π坌源笫缶映墒飙h(huán)境的影響。本部分的實(shí)驗(yàn)通過分析奧硝唑在雄性大鼠生殖器官局部及全身血藥濃度的變化與附睪中肉毒堿含量的相關(guān)性；研究了解奧硝唑?qū)Ω讲G中影響精子成熟的標(biāo)志性物質(zhì)——肉毒堿含量的影響；平行觀察大鼠附睪精子細(xì)胞膜完整性的動(dòng)態(tài)變化，探討奧硝唑引發(fā)動(dòng)物精子活力下降的可能原因。 第二部分奧硝唑?qū)π坌源笫笊称鞴傩螒B(tài)及相關(guān)因素的影響。通過睪丸和附睪形態(tài)學(xué)的變化及大鼠生殖器官細(xì)胞因子和性結(jié)

4、合蛋白指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化，進(jìn)一步了解奧硝唑?qū)Υ笫笊诚到y(tǒng)的影響及其抗生育作用機(jī)制。 主要研究結(jié)果如下：①雄性大鼠口服奧硝唑（200mg·kg－1）20天內(nèi)血清、睪丸和附睪組織中奧硝唑濃度的變化結(jié)果顯示：睪丸和附睪與血漿奧硝唑藥物濃度的比值呈直線向上的趨勢(shì)，在末次給藥時(shí)藥物濃度比值最高。附睪與睪丸奧硝唑藥物濃度的比值一直平衡在1.12－1.62。藥物動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)結(jié)果表明：奧硝唑能透過血睪屏障，在睪丸和附睪中累積，這種累積與給藥的時(shí)效呈正相

5、關(guān)，附睪對(duì)奧硝唑的累積量高于睪丸。②在測(cè)定血漿、睪丸和附睪奧硝唑血藥濃度的同時(shí)，平行對(duì)附睪中肉毒堿的含量進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：奧硝唑可以使附睪中肉毒堿的含量迅速降低，并始終維持在26 mmol·L-1水平。③而肉毒堿水平減低導(dǎo)致對(duì)精子質(zhì)量的影響，在精子低滲腫脹試驗(yàn)的結(jié)果中得到進(jìn)一步證實(shí)：大鼠在服用奧硝唑第10天，從附睪尾部精子低滲腫脹率低于正常值的50％。④連續(xù)對(duì)大鼠睪丸及附睪組織形態(tài)學(xué)的動(dòng)態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)，附睪組織在給藥10天后，細(xì)胞

6、結(jié)構(gòu)遭到破壞；而同樣的破壞程度在給藥15天后才在睪丸細(xì)胞中見到，觀察結(jié)果說明了奧硝唑進(jìn)入大鼠的生殖系統(tǒng)后主要作用與附睪組織，對(duì)睪丸組織的作用相對(duì)較弱。⑤IL-6和IL-10生殖器官表達(dá)顯示：用藥1天組與用藥5天組與正常對(duì)照組比較其表達(dá)沒有明顯的差別；用藥10天組與正常對(duì)照組比較其表達(dá)增多，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；用藥15天組及用藥20天組與正常組比較其表達(dá)增多比較明顯（有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異），其中尤以附睪顯著。此結(jié)果說明奧硝唑?qū)Υ笫笊称鞴偌?xì)胞的影響以

7、附睪為主，但隨體內(nèi)蓄積藥量的增加，睪丸所受影響也會(huì)加劇。⑥性激素結(jié)合蛋白（SHBG）在附睪、睪丸的表達(dá)表明：大鼠附睪組織用藥1天組與用藥5天組與正常對(duì)照組比較其表達(dá)沒有明顯的差別，用藥10天組較正常對(duì)照組比較其表達(dá)減少，用藥15天組與用藥20天組與正常組比較其表達(dá)減少比較明顯。給藥組大鼠睪丸組織的SHBG表達(dá)與正常對(duì)照組相比無顯著性差異。 綜合以上研究結(jié)果，奧硝唑?qū)淤|(zhì)量的影響首先是藥物透過血-睪屏障進(jìn)入并在附睪組織中蓄積，干

8、擾附睪對(duì)肉毒堿的主動(dòng)攝取，進(jìn)而改變精子發(fā)育成熟的環(huán)境，干擾精子成熟，最終導(dǎo)致精子質(zhì)量的下降。在干擾精子成熟的過程中，細(xì)胞因子IL-6，IL－10在睪丸、附睪中的表達(dá)隨給藥時(shí)間而增加，表明奧硝唑除抑制內(nèi)毒素的主動(dòng)吸收外，還可通過激活I(lǐng)L-6，IL－10的表達(dá)，影響精子的成熟發(fā)育。而性激素結(jié)合蛋白（SHBG）在附睪、睪丸的表達(dá)提示：奧硝唑?qū)е碌拇笫缶淤|(zhì)量下降不會(huì)降低大鼠睪丸及附睪組織的雄激素水平，不影響生殖器官的生精作用。各項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果在定