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1、- 1 -熱點 熱點 15 15 現(xiàn)代生物科技專題 現(xiàn)代生物科技專題1.(2018·安徽蕪湖高三 5 月模擬)科研工作者欲將某抗鹽基因?qū)朐|(zhì)體培育抗鹽大豆。請回答下列問題:(1)為獲得大量抗鹽基因,可通過________技術(shù)進行擴增,該技術(shù)需要 2 種引物的原因是________________________。(2)導(dǎo)入抗鹽基因的葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體應(yīng)放在________(填“高滲”“等滲”或“低滲”)溶液中。原生質(zhì)體需再生
2、出________,經(jīng)脫分化獲得________,再分化獲得抗鹽植株,該過程的原理是________________。(3)利用帶有標(biāo)記的抗鹽基因探針與______________進行分子雜交,檢測抗鹽基因在受體細(xì)胞中是否轉(zhuǎn)錄。個體水平上的檢測抗鹽基因是否成功表達的方法是________________________。答案 (1)PCR DNA 雙鏈反向平行,復(fù)制時兩條鏈均為模板(2)等滲 細(xì)胞壁 愈傷組織 植物細(xì)胞的全能性(3)從轉(zhuǎn)
3、基因植株提取的 RNA 澆灌一定濃度的鹽溶液(或移栽到高鹽環(huán)境中進行實驗)解析 (1)擴增目的基因,可采用 PCR 技術(shù)。由于 DNA 雙鏈反向平行,復(fù)制時兩條鏈均為模板,因此 PCR 技術(shù)中需要兩種引物。(2)由于原生質(zhì)體無細(xì)胞壁,將其放入高滲溶液中會失水,低滲溶液中會吸水漲破,因此導(dǎo)入抗鹽基因的葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體應(yīng)放在等滲溶液中。將原生質(zhì)體培養(yǎng)成植株,需要再生出新的細(xì)胞壁,然后脫分化獲得愈傷組織,再分化才能獲得抗鹽植株。脫分化、再分化
4、的過程稱為植物組織培養(yǎng),其原理是植物細(xì)胞的全能性。(3)檢測抗鹽基因是否轉(zhuǎn)錄,采用分子雜交技術(shù),即利用帶有標(biāo)記的抗鹽基因探針與從轉(zhuǎn)基因植株提取的 RNA 進行分子雜交,如能形成雜交帶,則說明抗鹽基因在受體細(xì)胞中已轉(zhuǎn)錄。個體水平上檢測抗鹽基因是否成功表達,需要在個體水平上檢測其是否能抗高鹽環(huán)境,即給該個體澆灌一定濃度的鹽溶液或移栽到高鹽環(huán)境中進行實驗,觀察它的生長情況。2.(2018·河南洛陽一模)蘇云金桿菌是一種對昆蟲有致病作
5、用的細(xì)菌,其殺蟲活性物質(zhì)主要是一類伴孢晶體蛋白。某種蘇云金桿菌產(chǎn)生的伴孢晶體蛋白含兩條肽鏈,共由 126 個氨基酸組成,經(jīng)昆蟲腸液消化成毒性肽。我國農(nóng)科院采用逆轉(zhuǎn)錄 PCR 技術(shù)獲取大量伴孢晶體蛋白基因,然后將目的基因通過載體導(dǎo)入到植物體內(nèi),培育出抗蟲農(nóng)作物。請回答下列問題。(1)PCR 技術(shù)擴增目的基因,每一循環(huán)包括變性、________、________三步,一個目的基因通過 PCR 技術(shù)擴增,循環(huán) n 次,需要________對引
6、物。(2)若要使目的基因在受體細(xì)胞中表達,需要通過載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,原因是____________________________(答出兩點即可)。(3)下圖表示蘇云金桿菌中質(zhì)粒和目的基因所在的 DNA 中相關(guān)的限制酶的切割位點,在- 3 -素的植物流程如圖所示。請回答下列問題。限制酶 識別序列和切割位點EcoRⅠ G↓ATTCBamHⅠ G↓ATCCSmaⅠ CCC↓GGGApaⅠ GGGCC↓C(1)首先獲取的動
7、物干擾素基因稱為________。利用 PCR 技術(shù)擴增干擾素基因時,設(shè)計引物序列的主要依據(jù)是__________________________。(2)過程①中剪切質(zhì)粒和目的基因時所需要的工具酶是________和________。酶切后,目的基因形成的兩個黏性末端序列________。(3)過程②中將重組質(zhì)粒導(dǎo)入根瘤農(nóng)桿菌時,常用________處理根瘤農(nóng)桿菌,其目的是________________________________
8、________。(4)在培育愈傷組織的固體培養(yǎng)基中,除了無機鹽、有機營養(yǎng)物質(zhì)、瓊脂、植物激素外,還需添加卡那霉素??敲顾氐淖饔檬莀___________________。在分子水平上通常采用____________技術(shù)檢測干擾素基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞。答案 (1)目的基因 干擾素基因兩端的部分核苷酸序列(2)BamHⅠ EcoRⅠ 不相同(3)Ca2+ 使其成為感受態(tài)細(xì)胞,使質(zhì)粒更容易進入細(xì)胞(4)篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的植物細(xì)胞 DNA
9、 分子雜交解析 (1)在基因工程中,獲取的動物干擾素基因稱為目的基因。利用 PCR 技術(shù)擴增干擾素基因時,需要依據(jù)干擾素基因兩端的部分核苷酸序列設(shè)計引物序列。(2)題圖顯示:干擾素基因中存在 SmaⅠ的識別位點,若使用 SmaⅠ切割質(zhì)粒和外源DNA,則會破壞干擾素基因,因此過程①所示的構(gòu)建重組質(zhì)粒時不能使用 SmaⅠ切割。BamHⅠ和 EcoRⅠ的識別位點位于目的基因的兩側(cè),質(zhì)粒上也有 BamHⅠ和 EcoRⅠ的識別位點,因此,過程①中
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