核醫(yī)學習題集6章-體外放射分析技術

1、第六章 體外放射分析技術【學習目標 學習目標】了解體外分析技術的發(fā)展和現(xiàn)狀。掌握放射免疫分析的基本原理、基本方法及質量控制。掌握免疫放射分析的基本原理及與放射免疫分析法的主要區(qū)別。了解非放射免疫分析技術的幾種類型，特別是時間分辨熒光免疫分析技術的基本原理及特點。【內容要點 內容要點】一、體外分析的發(fā)展和現(xiàn)狀核醫(yī)學體外分析技術主要是利用放射分析方法或其派生的相關技術在體外進行機體內物質種類和含量的檢測。主要用來測定患者血清或體液中的激素

2、、生物活性物質和藥物濃度等。它最早是在 60 年代由 Yalow 和 Berson 等偶然觀察到 125I 標記的胰島素與胰島素抗體的結合與體系中存在的非標記胰島素的量呈一定的相關性。從而建立了放射免疫分析法。放射免疫分析具有其它方法所不能比擬的特點：①靈敏度高；②操作簡便，成本低。免疫放射分析屬于放射性非競爭結合分析，是在放射免疫分析理論的基礎上，隨著單克隆抗體技術的進步，不斷發(fā)展而來。非放射性標記的免疫分析從上世紀 80 年代以來得

3、到快速發(fā)展。如熒光酶免疫分析、化學發(fā)光酶免疫分析以及時間分辯熒光免疫分析等方法。二、放射免疫分析（一）基本原理放射免疫分析的基本原理是利用放射性標記的抗原和非標記抗原同時與限量的特異性抗體進行競爭性免疫結合反應。這種競爭結合反應可用下式表示： *Ag+Ab *Ag-Ab+*Ag+AgAg-Ab+Ag*Ag：標記抗原； Ag：非標記抗原； Ab：特異性抗體；示：Ag+*Ab Ag??*Ab+*AbAg:待測抗原

4、 *Ab：標記抗體原理是以 125I 標記抗體，用過量的標記抗體與待測抗原（或標準品）結合。形成標記抗體-抗原復合物和剩余的標記抗體。待反應平衡后，分離出多余的游離抗體，測上清液中的放射性，將待測抗原的結合率與標準抗原的標準曲線進行比較，即得所測樣品的含量。目前常用實驗方法有抗體夾心法、標記第三抗體法、雙標記抗體法。免疫放射分析具有反應速度快、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。但目前還主要限于蛋白質和多肽抗原，很多小分子半抗原和短

5、肽還不能應用。四、非放射免疫分析1、酶標記免疫分析 典型的酶標記免疫分析是酶聯(lián)免疫吸附法。2、化學發(fā)光免疫分析技術 主要有：化學發(fā)光免疫分析、化學發(fā)光酶免疫分析技術、電化學發(fā)光免疫測定。3、時間分辯熒光免疫分析 TRFIA 是一種特殊的熒光分析法，其原理是用具有長熒光壽命的物質作為熒光標記物（常用的是稀土元素，即鑭系元素）標記抗原或抗體，通過測定熒光量，定性或定量分析抗原或抗體。該方法具有特異性強、穩(wěn)定性好、適用范圍寬、樣品用量少