[雙語翻譯]醫(yī)學外文翻譯--上皮細胞-間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)換（譯文）

1、中文 中文 6000 字出處： 出處：Li J Y, Yong T Y, Michael M Z, et al. Review: The role of microRNAs in kidney disease.[J]. Nephrology, 2010, 15(6):599–608.泛素樣蛋白 泛素樣蛋白 FAT10 介導 介導 NF-κB 激活 激活JY Li ， TY Yong ， MZ Michael ， JM Gleadle摘要

2、：NF-κB 是一種先天免疫的中心介質(zhì)，與幾種腎病的發(fā)病機制都有關。FAT10 是一種 TNF-α-誘導的泛素樣蛋白質(zhì)，被公認為在免疫反應中發(fā)揮作用，但是 FAT10 是否參與TNF-α誘導的 NF-κB 活化過程仍然是未知的。在這里，使用 FAT10-/-和 FAT10+/+的小鼠體內(nèi)的腎小管上皮細胞（RTEC） ，我們觀察到 FAT10 的缺乏阻止了 TNF-α-誘導的 NF-κB 的活化，也降低了 NF-κB 調(diào)節(jié)基因的誘導。除去

3、正常的 IkBα的退化和多次泛素化，F(xiàn)AT10 的缺乏會降低 TNF-α-誘導的 IkBα的退化和 P65 在 RTECs（腎小管上皮細胞）中的核易位，表明 IkBα多重泛素化的有缺陷的蛋白酶體的降解。此外，F(xiàn)AT10 的缺乏降低了蛋白酶亞基低分子多肽 2（LMP2）的表達。用 FAT10 使 FAT10-/- 的腎小管上皮細胞的轉(zhuǎn)導恢復了 LMP2 的表達，TNF-α-誘導的 IkBα的降解，P65 的核易位和 NF-κB 的活化。

4、而且 LMP2 的轉(zhuǎn)染恢復了在 FAT10-/- 的腎小管上皮細胞中 IkBα的退化。人類的慢性腎臟疾病常見類型與 FAT10 在腎小管間質(zhì)的上調(diào)有關。這些數(shù)據(jù)說明了 FAT10 介導 NF-κB 活化，而且可能在慢性腎臟疾病中促進腎小管間質(zhì)炎癥。關鍵詞：生物標志物,糖尿病腎病, 上皮細胞-間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)換,腎疾病,microRNANF-kB 是一種泛素樣的轉(zhuǎn)錄因子，它在免疫反應，細胞凋亡和細胞周期調(diào)控中控制基因的表達。NF-kB 異

5、常的調(diào)節(jié)可能導致炎癥和自身免疫疾病，損害抗病毒免疫反應，并促進細胞的惡性轉(zhuǎn)化(1-3)。激活的 NF-kB，后續(xù)反應產(chǎn)生的細胞因子、趨化因子和粘附因子在一些腎臟疾病中是重要因素，這些疾病包括：糖尿病腎病(4,5)，高血壓性腎硬化(6,7)，IgA 腎病(8)，膜性腎病(9)和艾滋病病毒相關腎病(10-12)。經(jīng)典的 NF-kB 活化通路可能被各種刺激誘發(fā)，如：TNF-α。TNF-α-誘導的 NF-κB的活化是通過在質(zhì)膜上的腫瘤壞死因子受

6、體 I 來銜接參與的，隨后的信號傳導最后激活了IkB 激酶復合體，同時又反過來使 IkBα磷酸化。磷酸化的 IkBα迅速地多次泛素化，導致了 IkBα通過 26S 蛋白酶復合體的降解，NF-kB 的釋放，NF-kB 隨后又轉(zhuǎn)移到細胞核并激活靶位基因的轉(zhuǎn)錄(13-16)。26S 蛋白酶體，一種真核細胞中主要的蛋白酶，識別并降解多重泛素化蛋白（17,18） 。26S 蛋白酶體的蛋白水解核心復合體是 20S 核心顆粒，這種顆粒有幾個亞基構成。

7、低分子多肽 2（LMP2）是一種 IFN-γ誘導的亞基，它可以取代亞基 Y（又稱 delta 或者β1）在 20S 核心顆粒中（19） 。LMP2 在 20S 核心顆粒中的存在導致了糜蛋白酶和胰蛋白酶在體外的活化，調(diào)整蛋白酶的切割位點（20,21） 。一些研究已經(jīng)證明了 LMP2 在 IkBα的降解和 NF-kB 隨后的活化過程中扮演著重要的角色。我們先前報道了 FAT10 在體外艾滋病病毒感染的腎小管上皮細胞和來自艾滋病病毒攜帶者的腎

8、病患者和常染色體顯性遺傳的多囊腎的腎臟樣本中上調(diào)，而且增加的 FAT10 誘導腎小管上皮細胞的凋亡（25）在非應激狀態(tài)下的小鼠，F(xiàn)AT10 的敲除引起最小的表型改變，可是這些小鼠在注射了 LPS 之后表現(xiàn)出死亡敏感性的增加（26） 。FAT10 在成熟的樹突狀細胞和 B 細胞中表達（27,28） ，并且可以在各種組織中被前炎癥細胞因子 IFN-γ和TNF-α誘導（29，30） 。不過 FAT10 在免疫反應中的作用還沒有被研究。我們發(fā)現(xiàn)

9、 FAT10在 HIV-1 感染的腎小管上皮細胞中上調(diào)，而且這種上調(diào)類似于 NF-kB 調(diào)節(jié)基因活化的方式（31） ，加上我們知道 NF-kB 的活化是在多個水平上通過泛素蛋白激酶系統(tǒng)被控制的，這可以提示我們假設 FAT10 參與調(diào)控 NF-kB 的活化。IRES-EGFP 的共轉(zhuǎn)染并沒有被誘導。這些結(jié)果表明在 FAT10-/-小鼠 RTECs 中 FAT10 的表達恢復了 TNF-α和 LPS 誘導了構成 pGL2/NF-kB 的 N

10、F-kB 報道基因的活化。在 RTECs 中 FAT10 對于 對于 TNF-α誘導的核轉(zhuǎn)位是必要的 α誘導的核轉(zhuǎn)位是必要的在用 TNF-α處理之前，p65 主要位于 FAT10+/+和 FAT10-/-的 RTECs 的細胞質(zhì)中（圖4A） 。用 TNF-α（20ng/ml）處理 15 和 60 分鐘后，大部分 p65 在 FAT10+/+RTECs 的核中被檢測到,但是在 FAT10-/-RTECs 中卻是在細胞質(zhì)中檢測到，這表明 T

11、NF-α-誘導 NF-kB 的核易位在 FAT10-/-RTECs 中是有缺陷的。在來自于 FAT10+/+和 FAT10-/-小鼠中使用分離出的新鮮原始非永生的 RTECs 也觀察到相似的結(jié)果（如圖 4B） ，這表明了在 p65 易位中觀察到的缺陷并不是 T 抗原永生化的結(jié)果。我們也研究了是否 TNF-α誘導的 p65 易位在從小鼠腹腔分離出來的巨噬細胞中被破壞。這些在 FAT10+/+巨噬細胞 TNF-α誘導的 p65 核易位與在

12、FAT10-/-巨噬細胞中沒有區(qū)別（參考圖 1） 。FAT10-/-RTECs 用 HR-FAT10-IRES-EGFP 或者 HR-IRES-EGFP 慢病毒感染。3 天后，將細胞與 TNF-α（20ng/ml）或運載體一起培養(yǎng) 15 和 60 分。如圖 5 所示，在與 TNF-α培養(yǎng)前，在用病毒感染的 FAT10-/-RTECs 中定位 p65 蛋白質(zhì)；然而，用 TNF-α處理后（15和 60 分） ，p65 主要在用慢病毒感染的

13、FAT10-/-RTECs 的細胞質(zhì)中檢測出，而 p65 主要在用 HR-FAT10-IRES-EGFP 感染的 FAT10+/+RTECs 的細胞核中檢測出。這些結(jié)果表明用FAT10 表達運載體的 FAT10-/-RTECs 轉(zhuǎn)導是足以恢復 TNF-α誘導 NF-kB 核易位的。在 RTECs 中 FAT10 對于 對于 TNF-α誘導 α誘導 IkBα降解是必要的 α降解是必要的 在 FAT10+/+RTECs 總的 IkBα通過

14、Western blotting 方法分析證明了通過 5 分鐘的TNF-α處理厚蛋白水平是降低的,在 10 分鐘時達到了一個最低點，這個水平持續(xù)從基線降低了 60 分鐘（圖 6A,B） 。與此相反，在 TNF-α暴露后總的 IkBα蛋白質(zhì)在 FAT10-/-RTECs中并沒有降低，這說明 TNF-α誘導 IkBα降解在 FAT10-/-RTECs 中是缺乏的（圖 6A 和B） 。在 TNF-α暴露前后 IkBα的 mRNA 的表達在

15、FAT10+/+和 FAT10-/-RTECs 中并沒有顯著差異（圖 6C） 。用 FAT10-表達的慢病毒（HR-FAT10-IRES-EGFP）或空控慢病毒(HR-IRES-EGFP)轉(zhuǎn)導 FAT10-/-RTECs。經(jīng)過三天的轉(zhuǎn)導，將細胞與 TNF-α或運載體一起培養(yǎng) 10 分鐘。用TNF-α處理后，在用 HR-FAT10-IRES-EGFP 感染的 FAT10-/-RTECs 中而不是用控制病毒感染的細胞中 IkBα蛋白質(zhì)水平顯

16、著地降低了（圖 6D） 。因此，F(xiàn)AT10 在 FAT10-/-RTECs中的表達足以恢復 TNF-α誘導的 IkBα降解。在 FAT10-/-RTECs 中 TNF-α誘導 α誘導 IkBα磷酸化是不受影響的 α磷酸化是不受影響的 在 FAT10+/+和 FAT10-/-RTECs 中，p-IkBα的水平在用 TNF-α處理后快速地增加了，在 5 分鐘達到了最高水平。在 FAT10-/-RTECs 中 TNF-α誘導 IkBα磷酸化是

17、不會受損的，與 FAT10+/+RTECs 相比似乎還有些增加（圖 7） 。有趣的是，在 FAT10+/+RTECs 中用 TNF-α處理后 20 分鐘，pIkBα的水平返回到了處理前的水平，但是用 TNF-α處理 20 分鐘后在FAT10-/-RTECs 中 p-IkBα的水平比處理前仍有 6.2 倍的增加。這些結(jié)果表明 p-IkBα的降解在 FAT10-/-RTECs 中是受損的。FAT10 并不影響泛素化和磷酸化 并不影響泛素化和

18、磷酸化 IkBα也與 α也與 p-IkBα相互沒有影響 α相互沒有影響在用 TNF-α和 MG132（為了阻斷多重泛素化的蛋白質(zhì)的蛋白酶體降解）處理后，p-IkBα被免疫沉淀，用 Western blotting 方法將泛素化 p-IkBα用抗泛素化被檢測出。泛素化p-IkBα的水平在 FAT10+/+和 FAT10-/-TRECs 中是相似的（圖 8A） ，這表明在 FAT10-/-RTECs 中 NF-kB 的不能激活并不是 p-I