類彈性蛋白多肽的制備及其自組裝成微球載溶菌酶.pdf

1、類彈性蛋白多肽由于具有特殊的相變性質(zhì)、加之有優(yōu)良生物相容性、可在體內(nèi)進(jìn)行自然降解成氨基酸、無(wú)毒、且可通過基因工程進(jìn)行高通量生產(chǎn)等優(yōu)勢(shì),已成為生物醫(yī)藥材料領(lǐng)域的熱點(diǎn),在組織工程及藥物載體上具有廣泛應(yīng)用前景。本文利用自行設(shè)計(jì)的新型類彈性蛋白多肽[KV8F]n,研究了其制備、自組裝成微球的影響因素及作用機(jī)制以及將其用于溶菌酶的包埋等研究,所得結(jié)果如下:
　　首先,采用谷氨酰胺來確定氨基酸初始添加濃度,分析了各種氨基酸對(duì)類彈性蛋白多肽[K

2、V8F]40產(chǎn)量的影響。結(jié)果表明,蘇氨酸、精氨酸和半胱氨酸能較大提高產(chǎn)量,其中蘇氨酸最為明顯,產(chǎn)量可達(dá)126.9 mg/L,比對(duì)照82.4 mg/L增加了54％;利用響應(yīng)面設(shè)計(jì)對(duì)上述三種氨基酸進(jìn)行了3因素3水平實(shí)驗(yàn),經(jīng)優(yōu)化后所得理論最大產(chǎn)量為100.3 mg/L,經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,所得實(shí)驗(yàn)值為103.1 mg/L,與理論值吻合。但其產(chǎn)量低于單個(gè)氨基酸,經(jīng)交互作用分析表明,三種對(duì)產(chǎn)量有促進(jìn)作用的氨基酸之間無(wú)互作或者存在拮抗作用,如蘇氨酸和半胱氨

3、酸。
　　其次,以類彈性蛋白多肽[KV8F]n為對(duì)象,利用動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定了不同條件下其自組裝成微球的粒徑。結(jié)果表明:隨著分子量的增加ELPs形成的微球粒徑也隨之增大,粒徑的均一度減小;當(dāng)鹽濃度低于0.4 mol/L時(shí),鹽濃度的增加,微球粒徑相應(yīng)增加,而鹽濃度高于0.4 mol/L則呈減少的趨勢(shì),但粒徑均大于1.1μm;而當(dāng)ELPs末端融合木聚糖酶和1,3-丙二醇氧化還原酶后,其自組裝形成的微球粒徑急劇減小,約為游離ELPs的1/

4、10,分別為151.0 nm和174.2 nm。導(dǎo)致這種現(xiàn)象的原因可能是酶分子和ELPs通過靜電引力相互作用后,酶分子的空間位阻妨礙了ELPs分子的聚集。
　　最后,用純化的 ELP140包埋溶菌酶,測(cè)定不同條件下的包埋率,探索最適條件;同時(shí),測(cè)定純ELPs的粒徑和包埋溶菌酶后的ELPs的粒徑并推測(cè)其包埋的形式。結(jié)果表明:在 ELP140濃度為30μmol/L時(shí),其包埋率達(dá)到最高,可達(dá)23.24%,且當(dāng)ELPs與溶菌酶之比越高,包