刺五加和龍牙楤木體胚發(fā)生及其有效物質(zhì)累積研究.pdf

1、本論文以刺五加和龍牙楤木體細(xì)胞胚為材料，研究了體胚發(fā)生過程中3種抗氧化酶、3種防御酶活性的變化及其有效物質(zhì)的累積規(guī)律，結(jié)果如下。
　　1、刺五加體胚發(fā)生過程中，胚性愈傷組織(0d)、球形體胚形成(14d)、成熟-子葉體胚(35d)及次生體胚(42d)中，外切幾丁質(zhì)酶、內(nèi)切幾丁質(zhì)酶、β-1，3-葡聚糖酶活性均高于胚性愈傷組織時期的活性;球形胚形成時期(0～14d)，外切幾丁質(zhì)酶和β-1，3-葡聚糖酶活性活性逐漸增大，到第14d時，兩

2、種酶活性達(dá)到了最大;隨后兩種酶活性呈下降趨勢，到第35天（子葉胚）時期，兩種酶活性達(dá)到最底峰;內(nèi)切幾丁質(zhì)酶活性變化趨勢與外切幾丁質(zhì)酶和β-1，3-葡聚糖酶活性的變化趨勢正好相反。
　　2、初始接種量(0.5～2.5g)、蔗糖濃度(20～90g/L)、裝液量(60～120mL)、培養(yǎng)基強(qiáng)度(1/4MS～2MS)對懸浮培養(yǎng)刺五加體胚的生長和有效物質(zhì)累積有明顯的影響。在添加100 mL、3％蔗糖的MS液體培養(yǎng)基中，接種1g體細(xì)胞胚，在第

3、20d干重達(dá)到最大值，為接種時的16.97倍;同時體胚中刺五加苷B、E、異嗪皮啶含量均達(dá)到最高值分別為0.203mg/g、0.075mg/g、0.019mg/g，分別是最初的9.73倍、2.52倍、1.86倍。
　　3、茉莉酸甲酯（0～500μmol/L）處理刺五加體胚(3、7d)對其生長和有效物質(zhì)累積有顯著影響:250μmol/L茉莉酸甲酯處理7d時，刺五加苷B和異嗪皮啶含量達(dá)到最高（分別為0.544mg/g、0.179 mg/

4、g），分別是對照組的2.33倍、7.15倍;150μmol/L茉莉酸甲酯處理7d時，刺五加苷E含量最高(0.173mg/g)，為對照組的1.84倍。
　　4、龍牙楤木成熟體胚經(jīng)37℃高溫處理0～3d后于不加任何植物生長調(diào)節(jié)劑的WPM培養(yǎng)基中產(chǎn)生了次生體胚。經(jīng)高溫處理1d的外植體的次生體胚發(fā)生最好，誘導(dǎo)率為58％，平均每外植體次生體胚約為4個。
　　5、龍牙楤木成熟體胚經(jīng)高溫脅迫及次生體胚發(fā)生過程中，3種抗氧化酶活性具有明顯變

5、化。處理1d外植體中，3種抗氧化酶活性始終相對較高，高溫脅迫使過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)活性降低，超氧化物歧化酶(SOD)活性則升高。胚性細(xì)胞分化期（培養(yǎng)前15d），POD、SOD活性相對較高，CAT活性較低。次生體胚發(fā)育過程中（培養(yǎng)15d后），SOD、POD活性呈下降趨勢，CAT活性則變化不大。
　　6、高溫脅迫龍牙楤木次生體胚發(fā)生過程中，兩種防御酶（幾丁質(zhì)酶、β-1，3-葡聚糖酶）的活性具有顯著的變化，處理1d