礦區(qū)微生物核酸同步提取與分離的研究.pdf

1、中圖分類號Q 窆三二3I J l D C 5 7 ．0 8碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼 ! Q 5 三三密級 公玨礦區(qū)微生物核酸同步提取與分離的研究T h e s i I I m l 切n e o u s r e c o V e U a n d s e p a r a t i o n o f I m c l e i c a c i d丘o m m j l l j l l ge I Ⅳi r o 塒[ 1 1 e n t a lm i c r o

2、 b e s作者姓名：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)院( 系、所) ：指導(dǎo)教師：副指導(dǎo)老師：云慧生物工程核酸同步提取與分離資源加工與生物工程學(xué)院劉新星教授謝建平講師論文答辯日期型! 至：鯊 答辯委員會主中 南大學(xué)二。一三年五月中南大學(xué)碩士學(xué)位論文 摘要礦區(qū)微生物核酸同步提取與分離的研究摘要：微生物濕法冶金和微生物修復(fù)是解決低品位難處理礦產(chǎn)資源利用和污染治理的行之有效的方法。為了提高微生物作用的效率，就需要了解其中的微生物群落、浸礦微生物的功能基

3、因以及開發(fā)利用這類環(huán)境中的高效微生物資源。而該類問題的解答目前主要依賴于分子生物學(xué)方法，如廣泛應(yīng)用的I 心L P 、R e a l ．t i m eP C R 、基因芯片等，這些手段均需要以高質(zhì)量的D N A 或R N A 為基礎(chǔ)。目前，雖然針對環(huán)境樣品D N A 或R N A 單獨提取的方法有很多報道，同步提取的報道則很少，針對礦區(qū)樣品D N A 與R N A 提取方法報道的更少，因而本研究針對礦區(qū)樣品中微生物D N A 與R N A

4、 提取和分離的方法進(jìn)行探索。通過梯度實驗優(yōu)化提取環(huán)節(jié)中抽提緩沖液的p H 、蛋白酶K 量等條件以及分離環(huán)節(jié)中鹽的選擇、鹽濃度、核酸濃度以及分離條件等。研究結(jié)果表明，當(dāng)P I P E S 緩沖液p H 為7 ．O ，無蛋白酶K 作用時所得多種浸礦菌的核酸質(zhì)量均相對較好，而且所提D N A 與所用菌量呈正相關(guān)( R _ 0 ．9 9 ) ，砌嗆量與所用菌量無相關(guān)關(guān)系；該方法能成功用于A 朋．c 4 ．啦．肛f 等浸礦菌和環(huán)境樣品的核酸同步提

5、取，同時，當(dāng)菌量達(dá)1 0 9 時，提取所得的核酸量即可達(dá)D N A 6 ．2 9 士2 3 4 嵋，對蛆1 4 ．1 5 土2 ．3 6 ¨g 。核酸分離研究結(jié)果表明，三種鹽( N a C l ，L i C l ，C a C l 2 ) 中，L i C l 的分離效果最優(yōu)，其分離條件為，采用l ／4 體積的飽和氯化鋰作用于濃度約為4 0 0 n ∥此的核酸，經(jīng)6 ．8 小時的低溫靜置，通過離心即可分離D N A 與R N A

6、。經(jīng)該方法提取與分離所得核酸的純度較高，A 2 6 0 ／2 8 0 與A 2 6 0 ／2 3 0 值符合要求，2 6 0I u I l 處有單吸收峰；D N A 片段大于2 3 k b ，R N A 有完整的1 6 S 和2 3 S 兩條帶，所提核酸成功的用于了基因克隆文庫的構(gòu)建和基因逆轉(zhuǎn)錄分析，研究結(jié)果表明，該核酸提取分離方法能夠用于礦區(qū)樣品的微生物分子生物學(xué)分析，并可以推廣到其他樣品中。關(guān)鍵詞：提?。篋 N A 和I 斟A ；分