營(yíng)養(yǎng)調(diào)控綠僵菌產(chǎn)孢模式轉(zhuǎn)換機(jī)制的初步研究.pdf

1、產(chǎn)孢是絲狀真菌繁殖和適應(yīng)環(huán)境的重要過(guò)程，大多數(shù)真菌有兩種產(chǎn)孢方式：正常產(chǎn)孢和微循環(huán)產(chǎn)孢。溫度、營(yíng)養(yǎng)、pH等多種條件可以引起產(chǎn)孢方式發(fā)生變化，其中營(yíng)養(yǎng)是最為普遍的影響因素之一。但是，營(yíng)養(yǎng)調(diào)控產(chǎn)孢方式轉(zhuǎn)變的分子機(jī)制還不清楚。因此，篩選與產(chǎn)孢模式轉(zhuǎn)變相關(guān)的基因以及不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)調(diào)控產(chǎn)孢模式轉(zhuǎn)變的相關(guān)基因?qū)τ陉U明產(chǎn)孢轉(zhuǎn)變的分子機(jī)制、提高產(chǎn)孢量具有重要意義。
　　采用數(shù)字基因表達(dá)譜測(cè)序的方法，分析改變培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分引起昆蟲(chóng)病原真菌“綠僵菌(M

2、etarhizium acridum)”產(chǎn)孢方式變化過(guò)程中基因轉(zhuǎn)錄本的變化，得到了產(chǎn)孢模式轉(zhuǎn)變的相關(guān)文庫(kù)；通過(guò)差減比對(duì)分析，獲得了1,040個(gè)產(chǎn)孢模式轉(zhuǎn)變相關(guān)基因。其中，有137個(gè)基因參與正常產(chǎn)孢過(guò)程，436個(gè)基因參與微循環(huán)產(chǎn)孢過(guò)程，83個(gè)基因參與碳源對(duì)產(chǎn)孢模式轉(zhuǎn)換機(jī)制的調(diào)控過(guò)程，216個(gè)基因參與氮源對(duì)產(chǎn)孢模式轉(zhuǎn)換機(jī)制的調(diào)控過(guò)程，168個(gè)基因參與磷源對(duì)產(chǎn)孢模式轉(zhuǎn)換的機(jī)制的調(diào)控過(guò)程。對(duì)差異表達(dá)基因的功能分析表明：不同的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞

3、生長(zhǎng)、細(xì)胞增殖、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程相關(guān)的基因和途徑，實(shí)現(xiàn)對(duì)綠僵菌產(chǎn)孢方式轉(zhuǎn)變的調(diào)控。利用基因敲除和基因回復(fù)的方法對(duì)產(chǎn)孢模式相關(guān)基因 pp5基因（一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶基因）的功能研究發(fā)現(xiàn)：pp5基因?qū)G僵菌的產(chǎn)孢量、抗?jié)駸崮芰?、抗紫外能力起?fù)調(diào)控作用，對(duì)孢子的形態(tài)均一性起正調(diào)控作用，對(duì)綠僵菌的毒力沒(méi)有顯著影響。研究成果為闡明絲狀真菌產(chǎn)孢模式轉(zhuǎn)變的分子機(jī)制奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　主要研究結(jié)果如下：
　　①培養(yǎng)基中的單

4、一營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)變化（C、N、P）可以改變綠僵菌的產(chǎn)孢方式；
　　②573個(gè)基因在綠僵菌產(chǎn)孢方式變化中轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生明顯變化。其中，137個(gè)基因在正常產(chǎn)孢方式上調(diào)表達(dá)，436個(gè)基因在微循環(huán)產(chǎn)孢方式上調(diào)表達(dá)；
　?、?67個(gè)基因與不同的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)產(chǎn)孢方式轉(zhuǎn)變的調(diào)控相關(guān)。其中，83個(gè)基因與碳源對(duì)產(chǎn)孢方式轉(zhuǎn)變的調(diào)控相關(guān)，216個(gè)基因與氮源對(duì)產(chǎn)孢方式轉(zhuǎn)變的相關(guān)，168個(gè)基因與磷源對(duì)產(chǎn)孢方式轉(zhuǎn)變的調(diào)控相關(guān)；
　?、茈S機(jī)選取217個(gè)在微循