鴨場固廢堆肥腐熟菌種的分子鑒定、優(yōu)化及其應(yīng)用研究.pdf

1、分類號：Q939.96單位代碼：10364密級：學(xué)號：S10071005347安徽農(nóng)業(yè)大安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文鴨場固廢堆肥腐熟菌種的分子鑒定、優(yōu)化及其應(yīng)用研究MolecularIdentificationOptimizationofCompostingStrainsofDuckFarmSolidWasteitsApplicationinComposting研究生：胡紅偉指導(dǎo)教師：李呂木研究員申請學(xué)位門類級別：理學(xué)碩士專業(yè)名稱：微生物研究方

2、向：畜牧微生物所在學(xué)院：生命科學(xué)學(xué)院答辯委員會主席：2013年06月I摘要堆肥技術(shù)由于投入成本低，是目前處理畜禽廢棄物的一種常見方法，傳統(tǒng)堆肥存在發(fā)酵時(shí)間較長且堆肥產(chǎn)品的品質(zhì)不高的缺點(diǎn)，而外加堆肥菌劑則是解決這一問題的關(guān)鍵。本研究以本實(shí)驗(yàn)室篩選的在前期豬糞堆肥中效果較好的菌株SR109和DM109為出發(fā)菌株，對其進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，然后對兩種菌的培養(yǎng)條件和碳氮源進(jìn)行優(yōu)化，最后將兩種菌混合制成的菌劑以不同接種量接種到鴨場固廢堆肥中，以確定

3、菌劑適宜的添加量。1、堆肥菌種分子生物學(xué)鑒定堆肥菌種分子生物學(xué)鑒定。采用細(xì)菌基因組DNA抽提試劑盒提取菌株SR109和DM109的基因組DNA，PCR擴(kuò)增，用2%的瓊脂糖凝膠對兩株菌PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳，將得到的16SrDNA序列利用康維世紀(jì)膠回收試劑盒進(jìn)行回收，序列由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行測序，菌株SR109序列長度為1437bp，菌株DM109序列長度為1443bp，將測序結(jié)果提交Genbank數(shù)據(jù)庫，菌株SR109和D

4、M109登錄號分別為JQ734474和JQ734475。將測定的序列用blast軟件與Genbank中已有序列進(jìn)行同源性比較，采用Mega4.0軟件菌株進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，結(jié)果為：菌株SR109與芽孢桿菌屬的Bacillusvallismtis和Bacillusmethylotrophicus親緣關(guān)系最近，同源性達(dá)100%，說明菌株SR109為芽孢桿菌；菌株DM109與沙雷氏菌屬的Serratiagrimesii和Serratiaprot

5、eamaculans親緣關(guān)系最近，同源性達(dá)96%，說明菌株DM109為沙雷氏菌。2、堆肥菌種培養(yǎng)條件優(yōu)化研究堆肥菌種培養(yǎng)條件優(yōu)化研究。試驗(yàn)采用全自動10L發(fā)酵罐進(jìn)行優(yōu)化，選擇pH值、攪拌轉(zhuǎn)速、溫度、通氣量4個(gè)因素，分別設(shè)定3個(gè)水平進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)，以細(xì)菌數(shù)目為指標(biāo)確定培養(yǎng)條件的最佳組合。結(jié)果表明，菌株SR109最佳培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為45℃，pH值為7.5，攪拌轉(zhuǎn)速為200rmin，通氣量為5Lmin，按照這一條件進(jìn)行培養(yǎng)，2

6、0h后菌數(shù)達(dá)到6.02108mL。菌株DM109最佳培養(yǎng)條件為：溫度37℃，pH7.2，轉(zhuǎn)200rmin，通氣量4Lmin，按照這一條件進(jìn)行培養(yǎng)，20h后菌數(shù)達(dá)到8.65109mL。3、堆肥菌種碳氮源優(yōu)化堆肥菌種碳氮源優(yōu)化。在最適的培養(yǎng)條件下，利用廉價(jià)的碳氮源以便工業(yè)化利用。氮源有豆粕粉、菜粕粉和芝麻粕，碳源有麩皮、玉米粉、淀粉、米糠、米粉。結(jié)果表明，菌株SR109最優(yōu)工業(yè)培養(yǎng)基為：豆粕30gL，玉米粉10gL，NaCl5gL，按此配方