雞糞除臭菌的篩選鑒定、培養(yǎng)條件優(yōu)化及其應(yīng)用研究.pdf

1、隨著我國(guó)規(guī)模化、集約化養(yǎng)殖場(chǎng)的迅速發(fā)展，家禽糞便的集中堆放給環(huán)境帶來(lái)了巨大壓力。雞糞堆放過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生惡臭氣體，其中NH3和H2S是最主要的惡臭氣體。生物除臭是利用添加外源微生物的方法調(diào)控雞糞堆放過(guò)程中NH3和H2S的釋放，通過(guò)減少物質(zhì)分解的氣態(tài)揮發(fā)損失，能以較低成本控制臭味的產(chǎn)生，是目前處理家禽糞便臭氣的的重要方法。本研究通過(guò)篩選得到除臭效果較好的三個(gè)菌株YF1、YS2和J2，對(duì)其進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，培養(yǎng)條件優(yōu)化，并制成微生物除臭劑噴灑

2、到堆肥雞糞上，以確定除臭劑除臭效果。
　　1、菌株篩選。采用稀釋涂平板法從養(yǎng)殖場(chǎng)排污口污泥、水族箱水體及雞糞中篩選菌株。然后將篩選到的菌株接種到雞糞中，通過(guò)硼酸吸收法和亞甲基藍(lán)分光光度法測(cè)定菌株對(duì)雞糞中NH3和H2S釋放量的影響，從中篩選出高效除臭菌株。抑氨菌株YF1和YS2單獨(dú)接種分別使雞糞中氨氣的釋放量減少26.0％和28.4％，而兩株菌1:1混合接種可使NH3釋放量降低75.6％。脫硫菌株J2接種可使雞糞中H2S的釋放量減少

3、90.6％。菌株YF1、菌株YS2和菌株J2可能是高效除臭菌株。
　　2、菌株分子生物學(xué)鑒定。菌株YF1、YS2和J2的DNA序列的提取和測(cè)序由寶生物工程（大連）有限公司完成，以細(xì)菌基因組DNA為模板擴(kuò)增16S rDNA，以Seq Forward、Seq Internal、Seq Reverse為引物進(jìn)行DNA測(cè)序。菌株YF1、YS2和J2序列長(zhǎng)度分別1451bp、1388bp和1470bp，將測(cè)序結(jié)果提交Genbank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行

4、比對(duì)，菌株 YF1、YS2和 J2分別為假單胞菌屬(Pseudomonas sp.)、中華根瘤菌屬(Sinorhizobium sp.)和賴氨酸芽孢桿菌屬(Lysinibacillus sp.)。菌株YF1、YS2和J2登錄號(hào)分別為KJ023064、KJ023065和KJ023066。將測(cè)定的序列用blast軟件與Genbank中已有序列進(jìn)行同源性比較，采用Mega5.0軟件菌株進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。
　　3、菌株培養(yǎng)條件優(yōu)化研究。采

5、用10L自動(dòng)發(fā)酵罐系統(tǒng)對(duì)菌株YF1、YS2和J2的培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化。選擇pH、轉(zhuǎn)速、溫度、通氣量4個(gè)因素，每個(gè)因素設(shè)定3個(gè)水平進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)。以細(xì)菌數(shù)目為指標(biāo)確定培養(yǎng)條件的最佳組合，使用SAS軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果表明，YF1菌株最適培養(yǎng)條件為溫度28℃，pH7.0，通氣量5L/min，轉(zhuǎn)速200 r/min；YS2菌株最適培養(yǎng)條件為溫度30℃，pH6.5，通氣量5L/min，轉(zhuǎn)速300 r/min；菌株J2最適培養(yǎng)條件

6、為溫度30℃，pH6.0，通氣量3L/min，轉(zhuǎn)速100 r/min。溫度、pH、接種量和通氣量對(duì)YF1、YS2影響均極顯著（P<0.01）；溫度和pH對(duì)J2影響均極顯著（P<0.01）。
　　4、微生物除臭劑在生產(chǎn)中的應(yīng)用研究。試驗(yàn)在A、B、C三個(gè)堆肥車間（3000m3）內(nèi)進(jìn)行，將三種菌等比例混合制備微生物除臭劑噴灑于雞糞表面，定點(diǎn)定時(shí)測(cè)量車間內(nèi)NH3和H2S濃度以研究微生物除臭劑在生產(chǎn)中的應(yīng)用效果。在除臭劑噴灑之前A、B、C三