睪丸酮降解菌的篩選鑒定及降解條件優(yōu)化.pdf

1、當前，隨著人口數(shù)量的增加、城市化進程的加快和激素類藥物的大量使用，越來越多的激素類化合物被排放到環(huán)境中，對生態(tài)環(huán)境和人類健康造成了極大的破壞和影響。激素類化合物，又稱為環(huán)境內(nèi)分泌干擾物質(zhì)，是具有高穩(wěn)定性、難降解的一類持久性有機化合物，其低劑量就可以引起嚴重生理效應，因此其所引起的環(huán)境污染問題備受關注而成為研究的熱點，其中環(huán)境雄激素是主要的內(nèi)分泌干擾物之一，對生物的健康和生態(tài)安全構成嚴重的威脅。
　　本研究采用富集培養(yǎng)的方法，從福建

2、某池塘底部的污泥中分離篩選和純化到一株高效睪丸酮降解菌，對睪丸酮降解菌在液體培養(yǎng)基的降解特性進行了研究，以及進行16SrDNA的鑒定和系統(tǒng)發(fā)育學分析，并且對該菌株的降解條件進行了響應曲面的優(yōu)化研究。主要研究結(jié)果和結(jié)論歸納如下：
　　1、對從池塘的污泥中分離的菌源C53進行純化，獲得四株睪丸酮降解菌C53-20、C53-25、C53-38、C53-42。在睪丸酮濃度為1mM的液體無機鹽培養(yǎng)基中37℃、180 r/min培養(yǎng)12小時，

3、細菌C53-20、C53-25、C53-38、C53-42對睪丸酮的降解率分別為：45％、26%、29%和32%。
　　2、通過對菌株C53-20進行16SrDNA的PCR擴增，得到一條長度為1.5 kb的片段，測序的結(jié)果與Genbank數(shù)據(jù)庫進行序列同源性比對，并進行系統(tǒng)發(fā)育學的分析，確定其菌株為克雷伯氏菌屬。
　　3、在12小時內(nèi)對培養(yǎng)中的菌株C53-20每隔1小時取一次樣，分別用紫外可見分光光度法(UV-Vis)和高效

4、液相色譜（HPLC）測定菌液中的生物量和其睪丸酮含量。用SPSS統(tǒng)計軟件對所測得的兩組數(shù)據(jù)進行相關性分析。根據(jù)相關性分析結(jié)果，在0.99置信度(P<0.01)下兩者的相關系數(shù)為0.893，可知菌株生長量與降解睪丸酮之間呈顯著線性相關。
　　4、應用響應面法來優(yōu)化能夠促進C53-20菌株生物量大量生長的主要培養(yǎng)條件，以此來尋找菌株C53-20降解睪丸酮的最佳培養(yǎng)條件。通過單因素實驗對菌株C53-20的降解條件進行了優(yōu)化，結(jié)果表明：睪

5、丸酮的最佳濃度為0.5mM，pH的最佳值為6.5,溫度的最佳值為37℃。再通過最陡爬坡實驗分析以確定各個因素的步長和方向。最后采用Box-Behnken實驗，通過SAS的RSREG（響應面回歸）過程對數(shù)據(jù)進行分析及二次回歸擬合，并基于所得模型繪制3D響應曲面及2D等高線圖，所得結(jié)果表明三個因素之間的相互作用顯著影響菌的生長量。同時，得出C53-20菌株在降解睪丸酮的過程中最佳的溫度為38.9℃，睪丸酮最佳的濃度為2.28mM，最佳的pH