蘆丁降解菌的分離篩選及鑒定.pdf

1、槲皮素和異槲皮素為黃酮類物質(zhì)，具有顯著的藥理活性，因此，槲皮素和異槲皮素的生產(chǎn)方法成為近年來的研究熱點。本實驗對槐樹密集區(qū)的土壤樣品中蘆丁降解菌株的分離篩選方法進行探索，初步建立了蘆丁降解菌株的分離篩選方法。首先從河北大學(xué)校園內(nèi)的槐樹密集區(qū)采集土樣，采用蘆丁平板稀釋涂布法分離土壤中的微生物，然后通過聚酰胺薄層層析和高效液相層析篩選出活性菌株，最后對篩選出的活性菌株進行轉(zhuǎn)化能力的測定，并從形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方面對活性菌株進行鑒定。

2、　　本研究共從土壤中篩選出9株具有蘆丁降解活性的菌株，其中7株產(chǎn)槲皮素，分別為D3、Z43、Z46、Z50、Z54、Z55和Z58，2株產(chǎn)異槲皮素，分別為C44和Z9。對9株活性菌株在不同時間內(nèi)的轉(zhuǎn)化能力進行測定，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中槲皮素/異槲皮素的量在一定的時間內(nèi)隨轉(zhuǎn)化時間的延長而不斷增大，當(dāng)達(dá)到最大后，又隨時間的不斷延長而減少，比較同一菌株不同轉(zhuǎn)化時間峰譜圖，推斷是菌株產(chǎn)生的酶不單一所導(dǎo)致的。其中菌株C44，Z50，Z55菌株的轉(zhuǎn)化能力較高

3、。
　　通過對轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中的糖進行薄層層析，確定了菌株 D3，Z43，Z46，Z50，Z54，Z55和Z58通過產(chǎn)生β-蕓香糖苷酶來降解蘆丁生成槲皮素，菌株 C44，Z9通過產(chǎn)生α-鼠李糖苷酶將蘆丁降解為異槲皮素。
　　對分離出的9株蘆丁降解菌株從形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方面進行了鑒定，D3菌株為解葡聚糖類芽孢桿菌(Paenibacillus glucanolyticus)，C44菌株歸為岸濱芽孢桿菌(Bacillus litora