淡色庫(kù)蚊抗氯氰菊酯機(jī)理及防治研究.pdf

1、淡色庫(kù)蚊（Culex pipiens pallens）是我國(guó)騷擾性家棲優(yōu)勢(shì)蚊種，主要分布在中國(guó)的中東部和北部地區(qū)，是乙型腦炎、班氏絲蟲病和西尼羅病毒的傳病媒介。目前控制蚊子危害主要依賴于化學(xué)合成殺蟲劑，其中以擬除蟲菊酯類殺蟲劑廣泛使用的殺蟲劑，但是它們的大量使用，使許多害蟲陸續(xù)產(chǎn)生了抗藥性，并逐漸出現(xiàn)交互抗性、多重抗性，甚至出現(xiàn)聯(lián)合抗性，深入研究抗性的分子和生理生化機(jī)理對(duì)于建立高敏感的抗性檢測(cè)方法和制定綜合防治措施具有重要意義。

2、　　本研究的主要內(nèi)容包括以下五個(gè)方面：對(duì)本實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的淡色庫(kù)蚊幼蟲和成蚊的抗性測(cè)定；對(duì)淡色庫(kù)蚊Na+通道不同結(jié)構(gòu)域片段ⅠS6、ⅡS4-S6、ⅡS全長(zhǎng)片段和ⅢS6的基因克?。槐容^不同齡期與性別的蚊蟲體內(nèi)羧酸酯酶（CarE）、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GSTs）、O-脫甲基酶和乙酰膽堿酯酶（AChE）的酶活力測(cè)定；最后通過(guò)氯氰菊酯和溴蟲腈的單劑，以及與PBO復(fù)配來(lái)測(cè)定對(duì)淡色庫(kù)蚊的生物防治效果。
　　對(duì)淡色庫(kù)蚊的幼蟲和成蚊的生物測(cè)試中，處理24h

3、后，CR品系幼蟲和成蚊點(diǎn)滴及接觸筒的抗性系數(shù)分別為376.79、22.98和62.73，呈顯著性差異，已達(dá)到較高的抗藥性水平。
　　通過(guò)查找相關(guān)序列設(shè)計(jì)擊倒抗性（kdr）引物，成功克隆除了Na+通道不同結(jié)構(gòu)域的基因片段，分別為333bp的ⅠS6基因片段、371bp的ⅡS4-6基因片段、701bp的ⅡS基因片段和666bp的ⅢS6基因片段。按照推定的氨基酸差異只在ⅡS4-S6和ⅢS6，ⅠS6并無(wú)氨基酸的差異，其中ⅡS4-S6是已發(fā)現(xiàn)

4、的突變位點(diǎn)，并與蚊蟲抗藥性有關(guān)，但在ⅢS6并沒有報(bào)道存在本實(shí)驗(yàn)克隆的突變位點(diǎn)，該位點(diǎn)是否與抗藥性有關(guān)以及相關(guān)性情況如何還需進(jìn)一步進(jìn)行功能方面的深入細(xì)致的研究。
　　無(wú)論是CR品系還是SS品系，隨著齡期的增長(zhǎng)，蛋白質(zhì)含量升高，在蛹期蛋白質(zhì)含量為最高，為13.22μg/μl和14.17μg/μl。兩種品系的蛋白質(zhì)含量在幼蟲和蛹期無(wú)差異，成蚊有差異，CR品系均高于SS品系，且雌成蚊均高于雄成蚊。對(duì)蚊蟲的酶活力測(cè)定，在幼蟲期，CarE和O

5、-脫甲基酶的比活力，CR品系高于SS品系；在蛹期，CarE、O-脫甲基酶和GSTs的比活力，CR品系顯著高于SS品系；在雌成蚊中，這3種酶CR品系均高于SS品系，另外還發(fā)現(xiàn)AChE也有差異；在雄成蚊中，也發(fā)現(xiàn)O-脫甲基酶和GSTs比活力差異顯著。齡期不同，每種品系的酶活力有差異，分化的性別不同，也呈現(xiàn)了某些酶活力的差異。
　　對(duì)淡色庫(kù)蚊幼蟲和成蚊具有亞致死劑量的增效醚（PBO）濃度，其結(jié)果選擇的幼蟲幼蟲浸漬法的增效醚濃度為100p

6、pm、成蚊點(diǎn)滴法為0.2％和WHO接觸筒法為10%。
　　氯氰菊酯與PBO復(fù)配的對(duì)淡色庫(kù)蚊SS品系和CR品系的幼蟲的增效呈顯著性差異，24h的增效系數(shù)為6.97和115.32，成蚊點(diǎn)滴法的為3.62和18.26，WHO接觸筒法的為3.94和443.64。
　　溴蟲腈是一種慢效低毒的殺蟲劑，觀察時(shí)間大約在72h。作為單劑使用時(shí)，對(duì)兩種品系的藥效相當(dāng)，處理72h后，幼蟲的抗性系數(shù)為1.2，成蚊點(diǎn)滴法為1.23，成蚊接觸筒法為1.

7、33，無(wú)統(tǒng)計(jì)差異。氯氰菊酯與具有亞致死劑量的PBO復(fù)配時(shí), SS品系和CR品系幼蟲24h后的的增效系數(shù)為6.97和115.32，成蚊點(diǎn)滴法的為3.62和18.26，成蚊WHO接觸筒法的為3.94和443.64，增效作用均呈顯著性差異，表明PBO對(duì)氯氰菊酯具有明顯的增效作用。溴蟲腈與PBO復(fù)配后，幼蟲和成蚊均出現(xiàn)拮抗作用，表明溴蟲腈與氯氰菊酯對(duì)淡色庫(kù)蚊無(wú)交互抗性，顯示了對(duì)抗氯氰菊酯淡色庫(kù)蚊較好的防治效果。將氯氰菊酯與溴蟲腈復(fù)配，測(cè)定復(fù)配試