高效氯氰菊酯抗雄激素效應(yīng)及機(jī)制研究.pdf

1、高效氯氰菊酯(β-cyp)屬于擬除蟲菊酯類農(nóng)藥,現(xiàn)被廣泛使用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。動(dòng)物研究表明該農(nóng)藥對(duì)精子數(shù)量、形態(tài)和運(yùn)動(dòng)能力有損傷作用,人群資料也進(jìn)一步顯示其對(duì)男性生殖系統(tǒng)存在潛在性危害。高效氯氰菊酯是重要的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,其致雄(男)性生殖毒性的毒作用機(jī)制較為復(fù)雜,可能與雄激素受體(AR)介導(dǎo)的信號(hào)通路有關(guān)。受體報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)也稱受體轉(zhuǎn)錄激活試驗(yàn),是EPA推薦的用于環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(EDCs)篩選的in vitro方法之一。研究表明,這種方

2、法即可檢測(cè)化學(xué)物與受體結(jié)合的能力,又可檢測(cè)結(jié)合后引起的生物學(xué)效應(yīng),而且能夠區(qū)分激動(dòng)劑和拮抗劑,與受體結(jié)合試驗(yàn)相比可提供更多的信息,因此成為EDCs篩選的有力工具。本研究將動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和受體報(bào)告基因試驗(yàn)結(jié)合,闡明β-cyp的抗雄激素效應(yīng)及其作用機(jī)制,為揭示擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的抗雄激素效應(yīng)機(jī)制提供重要依據(jù),并為其他化學(xué)物質(zhì)的研究提供新的思路和技術(shù)平臺(tái)。
　　 第一部分高效氯氰菊酯對(duì)成年雄性大鼠生殖系統(tǒng)的影響
　　 目的:選擇高效氯

3、氰菊酯(β-cyp)為研究對(duì)象,研究其對(duì)雄性生殖系統(tǒng)的損傷作用及機(jī)制。
　　 方法:選擇成年雄性嚙齒類動(dòng)物15天染毒試驗(yàn),按體重將30只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為中、低劑量和對(duì)照共三組,每組10只。中、低劑量組灌胃量分別按30 mg和15 mgβ-cyp/kg BW灌胃15天,對(duì)照組則每天給與同體積玉米油。15天后稱大鼠終重并處死,將睪丸、附睪和精囊取出分別稱重。一側(cè)睪丸用于精子頭計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn),另一側(cè)睪九通過(guò)對(duì)其做免疫組化實(shí)驗(yàn)來(lái)觀測(cè)雄

4、激素受體(AR)的表達(dá)。
　　 結(jié)果:與對(duì)照組相比,給藥組的精子頭計(jì)數(shù)和每日精子生成量明顯減少,且AR水平也顯著降低,三個(gè)組的灰度值分別為113.79±13.58、96.09±5.95和77.27±5.44,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:β-cyp對(duì)雄性生殖系統(tǒng)是有損傷作用的,抑制AR的表達(dá)可能是其引起精子數(shù)下降的重要機(jī)制之一。
　　 第二部分高效氯氰菊酯的雄激素受體報(bào)告基因試驗(yàn)研究
　　 目的:通過(guò)A

5、R報(bào)告基因試驗(yàn)檢測(cè)β-cyp是否是AR拮抗劑。
　　 方法:建立以氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)為報(bào)告基因的雄激素受體(AR)報(bào)告基因試驗(yàn)。將表達(dá)AR的質(zhì)粒AR/pcDNA3.1、重組報(bào)告基因質(zhì)粒pMMTV-CAT和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒pSV-β-Gal共轉(zhuǎn)染非洲猴腎細(xì)胞株CV-1,以5α-雙氫爭(zhēng)酮(5α-DHT)為陽(yáng)性對(duì)照。CV-1轉(zhuǎn)染后用高效氯氰菊酯(β-cyp)染毒,通過(guò)檢測(cè)該物質(zhì)作用下CAT的蛋白表達(dá)水平,間接反應(yīng)內(nèi)源性基因的表達(dá)情