貴州省布依族、侗族、苗族Y染色體TTTY5、TSPY1、TSPY4基因拷貝數(shù)及單倍型多態(tài)性分析.pdf

1、【目的】研究貴州省布依族、侗族和苗族Y染色體的3個(gè)TTTY5、TSPY1和TSPY4基因的拷貝數(shù)多態(tài)性以及8個(gè)Y-SNP位點(diǎn)的SNP多態(tài)性，探討這3個(gè)人群的父系遺傳結(jié)構(gòu)。
　　【方法】選取貴州布依族、侗族、苗族3個(gè)少數(shù)民族男性樣本共292例，酚氯仿法提取基因組DNA。1）實(shí)時(shí)熒光定量法測(cè)定拷貝數(shù)：選用ABI公司TaqMan Copy Number Assays試劑盒TaqMan探針擴(kuò)增體系：一個(gè)反應(yīng)管中可同步擴(kuò)增目的基因和內(nèi)參基因

2、，并用Step One-plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)分析，使用StepOneTM Software v2.1軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)收集，Copy Caller v1.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，分別得到 TTTY5、TSPY1、TSPY4的相對(duì)拷貝數(shù)；2）巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性內(nèi)切酶長(zhǎng)度多態(tài)性（Nest PCR-RFLP）法測(cè)定SNP：根據(jù)Y染色體8個(gè)SNP位點(diǎn)M89、M9、M45、M130、M122、M134、M119、M95分別

3、設(shè)計(jì)兩步巢式PCR引物，Touch-down PCR進(jìn)行多重巢式PCR擴(kuò)增，用RFLP法得到各樣本Y-SNP分型結(jié)果。
　　【結(jié)果】1）3個(gè)貴州世居少數(shù)民族樣本中，TTTY5基因拷貝數(shù)變異范圍為1~39拷貝，布依族的拷貝數(shù)顯著低于侗族（P<0.01）和苗族（P<0.01），而侗族和苗族間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；苗族TSPY1基因拷貝數(shù)變異范圍為1~68拷貝，侗族的拷貝數(shù)顯著高于布依族（P<0.01）和苗族（P<0.01），苗族的TSP

4、Y1基因拷貝數(shù)顯著低于布依族（P<0.01）；TSPY4基因拷貝數(shù)變異范圍為16~39拷貝，布依族的拷貝數(shù)顯著高于侗族（P<0.01）和苗族（P<0.01），侗族的拷貝數(shù)低于苗族（P<0.01）。2）3個(gè)少數(shù)民族共檢測(cè)到H1(M130)、H4(M89)、H5(M9)、H6(M122)、H8(M134)、H9(M119)、H11(M95)、H14(M45)共8種Y-DNA單倍型，其中茂蘭布依族和沙井苗族單倍型H4分布較高，頻率分別為85.

5、2％和82.5%；四寨布依族、龍江侗族、高增侗族和威寧苗族在單倍型 H5中分布較高，頻率分別為42%、94.4%、100%和57%；雍里苗族則在單倍型H6中有最高分布，頻率為94.6%。8個(gè)單倍型中，僅在龍江侗族中檢測(cè)到單倍型H14。
　　【結(jié)論】貴州境內(nèi)布依族、侗族、苗族人群之間TTTY5、TSPY1、TSPY4拷貝數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Y-SNP單倍型的主成分分析結(jié)果表明，貴州布依族、侗族、苗族人群與國(guó)內(nèi)其他地域人群有較大遺傳差