生長(zhǎng)激素釋放激素受體(GHRH-R)拮抗劑抑制胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)及其機(jī)制.pdf

1、背景：
　　在全球范圍內(nèi)，胃癌的發(fā)病率高居惡性腫瘤的前四位，中國(guó)尤為高發(fā)，全球接近一半的新發(fā)胃癌病例在中國(guó)。同時(shí)胃癌是腫瘤導(dǎo)致個(gè)體死亡的前兩位原因之一。胃癌是一種高度異質(zhì)性的惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展與幽門螺旋桿菌及慢性炎性感染等相關(guān)，其預(yù)后與腫瘤發(fā)生的部位、病理分期、組織學(xué)類型、生物學(xué)行為以及治療措施密切相關(guān)。目前臨床上針對(duì)胃癌的治療首選方法仍然為手術(shù)治療。但其治療效果有限，5年生存率低于25％。研究表明分子靶點(diǎn)HER2，c-MET，

2、EGFR和mTOR等在胃癌上表達(dá)異常，針對(duì)其進(jìn)行治療能夠相應(yīng)提高胃癌的生存期。因此尋找胃癌潛在的新的分子靶點(diǎn)并針對(duì)不同的分子靶點(diǎn)采取個(gè)性化的治療方案將會(huì)是攻克胃癌治療的關(guān)鍵。生長(zhǎng)激素釋放激素(Growth Hormone-Releasing Honnone, GHRH)是經(jīng)典的內(nèi)分泌激素。在生理?xiàng)l件下， GHRH主要由人體下丘腦分泌產(chǎn)生并與垂體細(xì)胞中的生長(zhǎng)激素釋放激素受體(GHRH-R)結(jié)合后發(fā)揮相應(yīng)的調(diào)節(jié)作用。近來研究發(fā)現(xiàn)GHRH和G

3、HRH-R在乳腺癌、胃癌、肺癌及淋巴瘤等腫瘤中異常表達(dá)。在這些腫瘤中 GHRH／GHRH-R通路被認(rèn)為是生長(zhǎng)因子信號(hào)通路，它可能調(diào)節(jié)多種細(xì)胞內(nèi)通路的活性。最近研究發(fā)現(xiàn)，GHRH-R拮抗劑可抑制多種惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。因此，我們提出假說：“GHRH-R可能是胃癌潛在的治療新靶點(diǎn)， GHRH-R拮抗劑可下調(diào)GHRH-R的表達(dá)從而抑制胃癌的生長(zhǎng)”。為了進(jìn)一步了解GHRH-R調(diào)控胃癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制，根據(jù)前期數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果，結(jié)合胃癌是一種炎癥相關(guān)性

4、疾病，而PAK1是炎癥通路的節(jié)點(diǎn)這個(gè)事實(shí)。我們隨而提出了“抑制GHRH-R可下調(diào)PAK1炎癥通路從而達(dá)到抑制胃癌的目的”這個(gè)假說。
　　目的：
　　探索GHRH-R拮抗劑MIA-602對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，探討MIA-602在胃癌的作用機(jī)制。
　　方法：
　　運(yùn)用MTT實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)不同藥物濃度的GHRH-R拮抗劑 MIA-602對(duì)胃癌細(xì)胞存活的影響。采用克隆形成實(shí)驗(yàn)，觀察加 GHRH-R拮抗劑 MIA-602處理后

5、的胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)情況。利用western blot，免疫熒光和免疫組化實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)MIA-602抑制GHRH-R后胃癌細(xì)胞炎癥通路基因的變化情況。沉默和過表達(dá)炎癥通路節(jié)點(diǎn)基因PAK1，觀察GHRH-R對(duì)炎癥信號(hào)通路的影響。
　　結(jié)果：
　　前期GEO和Oncomine數(shù)據(jù)挖掘顯示，與正常組織相比，胃癌組織中 GHRH-R的表達(dá)明顯升高。MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著 GHRH-R拮抗劑的加藥濃度的增加，胃癌細(xì)胞的活力逐漸降低，挑選了1μM

6、的加藥濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)?？寺⌒纬蓪?shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用GHRH-R拮抗劑處理過的胃癌細(xì)胞，其生長(zhǎng)速度明顯減慢。接著 western blot，免疫熒光和免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，抑制 GHRH-R后明顯下調(diào)胃癌細(xì)胞炎癥通路基因的表達(dá)。沉默炎癥通路節(jié)點(diǎn)基因PAK1后，炎癥通路基因表達(dá)下降，過表達(dá)PAK1后則上升。過表達(dá)PAK1后，再加藥抑制GHRH-R不能影響炎癥通路基因的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　GHRH-R在胃癌中高表達(dá)，抑制 GHR