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1、微載體細(xì)胞培養(yǎng)是一種實(shí)現(xiàn)貼壁型細(xì)胞在生物反應(yīng)器中大規(guī)模懸浮培養(yǎng)的先進(jìn)技術(shù)。該技術(shù)在國(guó)外早已成功被應(yīng)用于多種疫苗、生物酶等生物制品的生產(chǎn)中。近年來(lái),該技術(shù)逐漸在我國(guó)生物制藥企業(yè)中興起并推廣。然而我國(guó)微載體的開發(fā)起步較晚,目前國(guó)產(chǎn)化微載體相對(duì)較少,市售的商品化微載體主要依賴進(jìn)口,價(jià)格昂貴。因此,研究并開發(fā)適用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的微載體仍然是我國(guó)生物制藥領(lǐng)域的一個(gè)重要課題。作為一種性能優(yōu)良的天然高分子聚合物,殼聚糖來(lái)源豐富、價(jià)格低廉、生物相容性好
2、,已在生物醫(yī)藥、廢水處理等領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。
本文在前人研究的基礎(chǔ)上,以殼聚糖為原料,用乳化交聯(lián)法制備了一種還原型殼聚糖微載體,解決了殼聚糖微球經(jīng)戊二醛交聯(lián)后存在的細(xì)胞毒性殘留問(wèn)題,使其更適合于動(dòng)物細(xì)胞的貼附與生長(zhǎng),滿足細(xì)胞培養(yǎng)的需要。
論文在參照進(jìn)口 Cytodex1微載體的技術(shù)指標(biāo)基礎(chǔ)上,對(duì)制備的還原型殼聚糖微載體從工藝參數(shù)上進(jìn)行了優(yōu)化,對(duì)其粒徑分布、表面特征、每克干球的微球數(shù)和比表面積、膨脹體積等參數(shù)及高壓滅
3、菌性能等方面進(jìn)行了優(yōu)化,得到了半透明、表面較光滑、輕微攪拌既能懸浮的還原型殼聚糖微載體,其粒徑分布在110~210μm之間,平均粒徑185um,每克干重的微球數(shù)達(dá)到2.1~2.5×106個(gè)/g,每克干重的表面積可達(dá)2256~2686cm2,膨脹體積10~11mL/g,比重1.07g,能夠耐受121℃30min的常規(guī)高壓滅菌,連續(xù)高壓5次不變形,同時(shí)能夠耐受0.25%胰蛋白酶的消化,性質(zhì)穩(wěn)定;以上指標(biāo)表明,通過(guò)乳化交聯(lián)法制備的還原型殼聚糖
4、微載體,粒徑較均勻,可用常規(guī)方法進(jìn)行高壓滅菌,在液體中呈淡黃色半透明狀,細(xì)胞在其表面生長(zhǎng)后,可直接在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。接下來(lái)對(duì)制備的還原型殼聚糖微載進(jìn)行了理化性質(zhì)的檢測(cè)。以進(jìn)口 Cytodex1微載體為對(duì)照,以3g/L載體量和1.6×105cells/mL的細(xì)胞密度接種,在125mL懸浮培養(yǎng)瓶中對(duì)敘利亞地鼠腎細(xì)胞(BHK-21)、中華倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)和恒河猴腎細(xì)胞(Marc-145)這三種疫苗生產(chǎn)常用的細(xì)胞進(jìn)行殼聚糖微
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