用于細(xì)胞內(nèi)陽離子檢測(cè)的新型比率型熒光探針的研究.pdf

1、研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞內(nèi)的微小化學(xué)變化都可能預(yù)示著生命體的重大改變，所以隨著生命科學(xué)的快速發(fā)展，對(duì)單個(gè)細(xì)胞甚至細(xì)胞器內(nèi)的小分子，離子，核酸或者蛋白質(zhì)的精準(zhǔn)，靈敏，快速檢測(cè)等要求更加迫切。熒光傳感技術(shù)因具有高選擇性、高靈敏度、原位實(shí)時(shí)快速分析、以及對(duì)樣品無損傷等優(yōu)點(diǎn)，而成為目前生物分析的熱點(diǎn)研究技術(shù)。事實(shí)證明不斷涌現(xiàn)的新型熒光分子探針，實(shí)現(xiàn)了對(duì)細(xì)胞內(nèi)的分子，離子等高靈敏的特異性檢測(cè)，為生物分析技術(shù)的發(fā)展提供了進(jìn)一步的技術(shù)支持。
　　本文通過

2、對(duì)熒光探針的研究，分別設(shè)計(jì)了一個(gè)基于氧雜葸衍生物的pH熒光探針FR-Lys，實(shí)現(xiàn)了定位溶酶體和動(dòng)態(tài)檢測(cè)其pH變化?；诳珂I能量轉(zhuǎn)移的雙光子比率型的Cu2+離子熒光探針Np-Rh和Pd2+離子熒光探針Np-Rh-Pd，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞內(nèi)金屬Cu2+離子和Pd2+離子的特異性識(shí)別和組織深度成像。主要內(nèi)容如下:
　　1.在第2章中，通過將氧雜葸，苯并噻唑，和嗎啉有機(jī)結(jié)合起來，設(shè)計(jì)了一個(gè)定位溶酶體的pH熒光探針FR-Lys。在該探針中，嗎啉起著

3、定位溶酶體的作用，氧雜葸衍生物隨pH變化而開關(guān)環(huán)，同時(shí)pH誘導(dǎo)鄰羥基苯苯并噻唑發(fā)生或抑制激發(fā)態(tài)分子內(nèi)質(zhì)子轉(zhuǎn)移(ESIPT)過程。實(shí)現(xiàn)了探針對(duì)pH4.0-6.3范圍內(nèi)比率型響應(yīng)。該響應(yīng)過程迅速且可逆，并且此FR-Lys易合成，光穩(wěn)定性好，低毒性等，這些優(yōu)點(diǎn)都該探針適合于溶酶體pH動(dòng)態(tài)成像，并取得好的效果。
　　2.在第3章中，我們利用雙光子熒光團(tuán)萘衍生物與具有螺內(nèi)酰胺環(huán)狀結(jié)構(gòu)的羅丹明B衍生物連接，構(gòu)建了一個(gè)具有D-π-A結(jié)構(gòu)的比率型

4、雙光子熒光探針平臺(tái)。該熒光探針平臺(tái)電子供體與受體通過跨鍵能量轉(zhuǎn)移機(jī)理發(fā)生高效的能量傳遞90％，同時(shí)該探針有大的雙發(fā)射峰位移為100 nm，大的雙光子活性吸收截面。我們利用常見的Cu2+離子為檢測(cè)對(duì)象構(gòu)建了熒光探針Np-Rh，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該探針對(duì)Cu2+離子特異性識(shí)別，并且檢測(cè)下限達(dá)3.0×10-7 M，在生理?xiàng)l件下穩(wěn)定性較好，同時(shí)實(shí)現(xiàn)了對(duì)活細(xì)胞的高分辨率雙光子比率型成像和較深的組織深度(70-180μm)成像。
　　3.在第4章中