一種檢測細胞內(nèi)RNA轉(zhuǎn)錄的熒光探針前體的合成研究.pdf

1、熒光探針技術(shù),由于其檢測方法的多樣性、靈敏度高、直觀性強、檢測速度快等諸多優(yōu)越性的存在,已得到了廣泛的應用。尤其近年來,隨著生物技術(shù)的發(fā)展,熒光探針技術(shù)已經(jīng)在蛋白質(zhì)、核酸、細胞檢測等方面發(fā)揮著越來越大作用。
　　 本課題設(shè)計合成了一種基于Click反應基礎(chǔ)上測定細胞內(nèi)RNA轉(zhuǎn)錄的熒光探針。首先分別合成兩個前熒光物質(zhì),5-乙炔基尿苷(EU)和3-疊氮基香豆素,然后用前述5-乙炔基尿苷來標記體內(nèi)RNA(EU-RNA)。當用于RNA轉(zhuǎn)

2、錄檢測時,3-疊氮基香豆素通過一價銅催化的1,3環(huán)加成反應來檢測EU標記的RNA(EU-RNA),在熒光顯微鏡下觀察RNA的轉(zhuǎn)錄情況,從而說明RNA的表達是否異常。
　　 實驗中以尿苷、醋酐、IC1和三甲基硅基乙炔為原料通過酯化、氯代、sonogashira偶聯(lián)、酯醇解等反應合成了5-乙炔基尿苷(EU),產(chǎn)率達到65％;以水楊醛、N-乙?；拾彼岷童B氮化鈉為原料通過Schiff堿水解、重氮化和疊氮化反應合成了3-疊氮基香豆素,產(chǎn)