磷脂微乳電動色譜系統(tǒng)的構(gòu)建及其在預(yù)測藥物血腦屏障通透性中的應(yīng)用.pdf

1、微乳電動色譜（MEEKC）是使用微乳作為分離介質(zhì)的電動色譜技術(shù)，因其具有高效的分離效率、廣泛的適用范圍和極少的樣品消耗量等優(yōu)勢，自有研究報道以來一直很受關(guān)注，特別適合于復(fù)雜混合物的分析。作為MEEKC分離介質(zhì)的微乳液是一種納米級的液滴分散在另一種不相混溶的液體中形成的熱力學(xué)穩(wěn)定體系。因為微乳液滴具有內(nèi)部疏水、外側(cè)親水和各向異性的類生物膜結(jié)構(gòu)，理論上 MEEKC也可像其他生物分配色譜（BPC）一樣，如磷脂膜色譜（IAM）、膠束液相或電動色

2、譜（MLC，MELC）和脂質(zhì)體電動色譜（LEKC）等，用于模擬化合物在生物膜上的被動擴散過程。但是由于經(jīng)典的MEEKC常以十二烷基硫酸鈉（SDS）為表面活性劑，其微乳構(gòu)成與生物膜成分存在明顯差異，MEEKC應(yīng)用于模擬生物膜研究的報道尚為少見。本研究以含有生物類表面活性劑磷脂和膽酸鈉（SC）的微乳作為電動色譜中的分離介質(zhì)，通過對不同結(jié)構(gòu)化合物集合的定量結(jié)構(gòu)-保留（QSRR）關(guān)系研究，分析新型磷脂MEEKC體系中的溶質(zhì)保留機制，并選擇一個較

3、好的MEEKC體系用于藥物穩(wěn)態(tài)腦/血漿濃度比值（log BB）的預(yù)測。
　　目的：以大豆磷脂為主要表面活性劑制備適合毛細管電動色譜使用的的微乳體系，應(yīng)用溶劑化參數(shù)模型研究化合物的定量結(jié)構(gòu)保留關(guān)系，闡述化合物與微乳擬生物膜間的分子間作用機制，并考察磷脂微乳電動色譜體系作為藥物血腦屏障通透性體外預(yù)測工具的實際價值。
　　方法：以大豆磷脂、SDS、膽酸鈉或全氟辛基磺酸鉀等為表面活性劑，以正丁醇為助表面活性劑，庚烷、辛醇或肉豆蔻酸異

4、丙酯（IPM）作為油相，磷酸鹽溶液為水相，制備適合于毛細管電泳使用的微乳體系。通過測定微乳的粒徑和 Zeta電位變化考察微乳結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，通過測定苯甲酰胺、鄰甲苯胺和2-萘酚保留因子的重復(fù)性考察待測 MEEKC體系的穩(wěn)定性。使用動態(tài)涂層毛細管，以二甲基亞砜和十二烷基苯分別做為電滲流和微乳液滴的遷移標(biāo)記物，測定26個具有不同結(jié)構(gòu)的小分子中性化合物在微乳電動色譜體系下的保留因子，建立線性溶劑化能量關(guān)系（LSER）方程，并分析各分子間作用力在

5、溶質(zhì)分配到微乳液滴過程中的貢獻。利用LSER方程系數(shù)，采用矢量距離法比較各MEEKC體系間或與其他生物分配過程的類似性。應(yīng)用所建的微乳體系ME5，在pH7.4條件下測定了34種藥物的保留因子，并結(jié)合其他分子結(jié)構(gòu)參數(shù)建立藥物log BB值的預(yù)測模型。
　　結(jié)果：共制備了18種微乳體系，在只改變油相而其他組成不變的情況下，微乳的粒徑和Zeta電位沒有明顯差異，且在30 d內(nèi)無明顯變化。建立了26個小分子化合物在18種微乳體系下的LSE

6、R方程，各方程都是系數(shù)v和b的絕對值較大，且均是前者為正后者為負。油相種類及濃度對LSER方程系數(shù)無明顯影響。選擇ME5體系（2.00％SP-3.50%SC-6.0%丁醇-0.7%辛醇-87.80%20 mmol·L-1磷酸二氫鈉磷酸鹽緩沖液，pH7.4）模擬藥物的透血腦屏障過程，34種藥物的log k值與log BB值之間沒有顯著的線性相關(guān)性（log BB=0.7192 log k-0.2713，R2=0.487，n=34)。引入分子

7、量（MW）、分子體積（MV）、分子極性表面積（PSA）、氫鍵受體數(shù)目（HBA）、自由旋轉(zhuǎn)鍵個數(shù)（FRB）、氫鍵供體數(shù)目（HBD）六個理化參數(shù)后，所建立的多元回歸方程的相關(guān)性得到顯著提高：log BB=0.468+0.411 log k-0.219 PSA/10+0.488 MW/100+0.088 HBA-0.007 HBD+0.050 FRB-0.579 MV/100（R2=0.742，n=34）。
　　結(jié)論：
　　1.磷

8、脂類微乳電動色譜體系下的溶質(zhì)保留特征與其他微乳電動色譜體系特征基本相似，即溶質(zhì)的體積和氫鍵堿度對其在微乳中的保留影響較大，溶質(zhì)體積增加利于保留，氫鍵堿性增加減弱保留。各體系LSER方程系數(shù)間的矢量距離也非常接近，說明表面活性劑類型和油相組成對中性溶質(zhì)在微乳體系中的保留選擇性均無明顯影響。
　　2.應(yīng)用本研究篩選的磷脂微乳體系所測定的藥物log k值尚不能直接用于藥物log BB值的預(yù)測，只有結(jié)合其他分子結(jié)構(gòu)參數(shù)進行多元回歸才能建立