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文檔簡介
1、木葡聚糖內糖基轉移酶/水解酶(Xyloglucan endotransglycosylase/hydrolase,XTH)是一種重要的細胞壁修飾酶,在植物的細胞生長和生命活動中起著關鍵的作用。為研究觀賞植物中XTH基因結構以及在花瓣生長發(fā)育過程中的表達特征及功能,本研究以菊花、孔雀草和大麗花等三種菊科植物為研究對象,從花瓣中提取總RNA,克隆了XTH編碼基因的cDNA序列。在此基礎上,進一步研究了大麗花XTH基因(DpXTH)的結構及表
2、達特征,取得了如下試驗結果。
1.利用RT-PCR技術,克隆了菊花和孔雀草花瓣XTH基因的cDNA序列,分別命名為CmXTH(Genbank:HM752243)和TpXTH(Genbank:JN164663),兩者開放讀碼框的核苷酸序列為882bp,編碼293個氨基酸殘基,其中包含了XTH的活性位點DELDFEFLG。Blast分析結果表明,CmXTH和TpXTH與同為菊科植物的大麗花、非洲菊的同源性最高;通過聚類分析發(fā)現
3、,CmXTH和TpXTH基因編碼的多肽與擬南芥XTH家族中第一組的At-XTH7聚類到同一組,推測CmXTH和TpXTH具有木葡聚糖轉糖苷酶和木葡聚糖水解酶兩種活性。
2.利用3'RACE技術,獲得了大麗花花瓣DpXTH1基因的3'末端序列(Genbank:JN389794),克隆片段序列長為542bp,其中非編碼區(qū)長190bp。
以分段PCR法擴增得到了1條大麗花XTH基因組DNA序列,序列長1293bp,
4、包含4個外顯子與3個內含子,其外顯子區(qū)域與DpXTH1mRNA序列的相似性達93.52%,兩者所編碼的氨基酸序列同源性為93.49%,推測克隆的XTH基因組DNA序列為DpXTH1的同源基因,故命名為DpXTH2(Submission1523046)。通過與擬南芥XTH基因比對分析,發(fā)現DpXTH1與擬南芥At-XTH7同源性較高,DpXTH2外顯子序列與At-XTH6同源性較高,而At-XTH7和At-XTH6同屬于擬南芥第一組XTH
5、基因,因而推測DpXTH1和DpXTH2編碼的蛋白也具有木葡聚糖轉糖苷酶和木葡聚糖水解酶兩種活性。
以基因組DNA為模板,使用hiTAIL-PCR技術,分離獲得了DpXTH2基因起始密碼子上游長為125bp的部分序列。根據上述三方面試驗結果,初步探明了大麗花花瓣DpXTH基因的結構特征。
3.分別以β-actin、GAPDH和18SrRNA為內參基因,使用半定量RT-PCR技術,檢測了DpXTH1在大麗花花瓣
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