生長抑素在斑馬魚胰腺中的表達(dá)及敲降對其發(fā)育的影響.pdf

1、生長抑素(Somatostatin,SS)是廣泛存在于脊椎動物中的結(jié)構(gòu)多樣的肽激素家族,在脊椎動物的生長、發(fā)育和新陳代謝的多個方面發(fā)揮多種生物功能。生長抑素由多種細(xì)胞和組織產(chǎn)生,包括上皮細(xì)胞,神經(jīng)元細(xì)胞,免疫細(xì)胞,胰腺,胃腸道,中央和周圍神經(jīng)系統(tǒng),以及甲狀腺組織。研究顯示,SS1、SS4在斑馬魚早期胚胎期發(fā)育階段表達(dá),SS4主要在胰腺中表達(dá)。在前面的研究中我們克隆了SS3 cDNA,并且確定了SS3 mRNA在胚胎頭底部細(xì)胞中短暫表達(dá),

2、而在胰腺中持續(xù)表達(dá)。本研究首先用雙色原位雜交技術(shù)分析了SS3與其它胰腺表達(dá)基因如SS4、胰島素(insulin,ins)、胰高血糖素(glucagon,gcg)以及轉(zhuǎn)錄因子islet1的共表達(dá)模式,然后通過特異MO分別敲降SS3、SS4以及雙敲降分析了SS3,SS4的缺失對胰腺發(fā)育的影響,為研究SS在胚胎發(fā)育中的功能提供基礎(chǔ)。SS3與其它胰腺標(biāo)記基因mRNA雙色原位雜交分析顯示,在22 hpf,SS3的表達(dá)區(qū)域與ins的表達(dá)區(qū)域有部分的

3、重疊,在一部分的SS3的表達(dá)區(qū)域,ins強(qiáng)烈的表達(dá),而在30 hpf和48 hpf,ins主要在核心區(qū)域表達(dá),SS3的表達(dá)包圍著ins表達(dá)。在48 hpf,少量的SS3表達(dá)細(xì)胞與isletl表達(dá)細(xì)胞共表達(dá)；SS3和SS4有部分的共表達(dá),其共表達(dá)部位主要在外圍；而大部分的SS3表達(dá)細(xì)胞都共表達(dá)gcg。通過SS3 MO或SS4 MO注射,分別敲降了胚胎SS3或者SS4的表達(dá),然后檢測了SS4和SS3的交互表達(dá)變化。在SS3敲降胚胎中,SS4

4、 mRNA表達(dá)細(xì)胞的范圍擴(kuò)大；而在SS4敲降胚胎中,SS3 mRNA表達(dá)細(xì)胞的范圍擴(kuò)大；但是無論在SS3morphant中還是SS4 morphant中,gcg-表達(dá)細(xì)胞的數(shù)量和ins-表達(dá)細(xì)胞的數(shù)量都沒有變化。接著共注射SS3 MO和SS4 MO,我們同時敲降了SS3和SS4的表達(dá),在SS3和SS4同時敲降的胚胎中,gcg-表達(dá)細(xì)胞的數(shù)量和ins-表達(dá)細(xì)胞的數(shù)量都顯著減少。以上研究表明,SS3和SS4在調(diào)控胰腺發(fā)育過程中很可能具有互相