斑馬魚胰腺形態(tài)學(xué)觀察及siPDX-1對(duì)斑馬魚胰島發(fā)育的影響.pdf

1、目的： 1.建立斑馬魚實(shí)驗(yàn)室繁育系統(tǒng)以開展發(fā)育生物學(xué)研究。 2.觀察成年斑馬魚胰腺形態(tài)學(xué)特征及其胰島的形態(tài)、分布和數(shù)量，為胰腺發(fā)育及病理學(xué)研究提供正常參考值。 3.考察pdx-1與斑馬魚胰島發(fā)育的關(guān)系，探討胰腺發(fā)育調(diào)控的分子機(jī)制，為后續(xù)斑馬魚糖尿病模型的建立提供實(shí)驗(yàn)室資料。 方法： 1.利用魚缸(不同規(guī)格)、潛水泵及水族用紫外消毒燈、過濾器、給氧泵、控溫棒、計(jì)時(shí)電源插座等常見的養(yǎng)魚設(shè)備組建斑馬魚飼

2、養(yǎng)體系。 2.采用連續(xù)切片和鏡下解剖技術(shù)、HE染色和免疫熒光染色技術(shù)、透射電子顯微鏡技術(shù)對(duì)斑馬魚胰腺形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行觀察。 3.采用顯微注射和原位雜交技術(shù)、RT-PCR和siRNA技術(shù)、免疫熒光染色技術(shù)對(duì)經(jīng)過siRNA處理的斑馬魚胚胎胰腺形態(tài)和發(fā)育進(jìn)行靜態(tài)和動(dòng)態(tài)的觀察。 結(jié)果： 1.利用組建的斑馬魚繁育系統(tǒng)成功地對(duì)斑馬魚進(jìn)行繁殖和飼養(yǎng)，經(jīng)條件優(yōu)化后克服了某些商品化飼料使魚組織自發(fā)熒光的現(xiàn)象，并對(duì)斑馬魚胚胎發(fā)

3、育進(jìn)行了動(dòng)態(tài)觀察。 2.成年斑馬魚腸道周圍的胰腺包括4個(gè)分布相對(duì)獨(dú)立和集中的胰腺葉，在其中觀察到4類胰島，即主胰島、Brockmann體、離散胰島、單個(gè)β細(xì)胞；某些胰島同時(shí)含有β和α細(xì)胞，而另有些胰島只含有β細(xì)胞；每條魚胰島數(shù)平均為84.53±43.77，其下四分位數(shù)、中位數(shù)、上四分位數(shù)分別為55.25、70.50、112.00(n=40)；不同胰島在胰腺4葉當(dāng)中的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在不同的胰島細(xì)胞質(zhì)中觀察到

4、3種內(nèi)分泌顆粒。 3.RT-PCR結(jié)果顯示斑馬魚pdx-1基因在受精后的1細(xì)胞期即開始表達(dá)；原位雜交的結(jié)果表明，針對(duì)斑馬魚pdx-1mRNA的siRNA(siPDX-1)對(duì)受精后48小時(shí)、72小時(shí)斑馬魚胚胎的胰島器官形成有干擾作用；免疫熒光染色結(jié)果表明，siPDX-1對(duì)受精后5天的胚胎胰島器官形成有干擾作用。 結(jié)論： 1.利用普通家用觀賞魚設(shè)備可以在實(shí)驗(yàn)室組建成本低廉、功能可靠的斑馬魚繁育系統(tǒng)，某些商品化飼料由于