乙醇對斑馬魚血管發(fā)育的影響和機(jī)制探討.pdf

1、目的：人類胚胎期乙醇暴露對心血管系統(tǒng)有嚴(yán)重致畸作用。通過觀察不同濃度的乙醇處理對斑馬魚軀干部血管發(fā)育的影響，為探討乙醇對人類心血管系統(tǒng)發(fā)育和胎兒酒精綜合征的機(jī)制提供一定的線索。 方法：選取綠色熒光蛋白特異性標(biāo)記血管的轉(zhuǎn)基因斑馬魚，在體觀察乙醇對其軀干部血管發(fā)育的影響。用不同濃度（0％，1％，1.5％，1.75％V/V）乙醇處理斑馬魚胚胎（從出生后4.3小時至3天），觀察乙醇對斑馬魚胚胎致死率，致畸率，心跳和身長、和血管發(fā)育的影響

2、。用共聚焦顯微鏡在體觀察斑馬魚軀干部血管發(fā)育情況。RT-PCR方法檢測相關(guān)基因RNA水平的表達(dá)變化。最后采用過表達(dá)恢復(fù)實驗進(jìn)一步證明與之相關(guān)基因蛋白水平的功能。 結(jié)果：乙醇對斑馬魚胚胎致死率，致畸率，心跳和身長都有明顯影響，并呈濃度依賴性的特點(diǎn)。乙醇導(dǎo)致斑馬魚軀干部血管發(fā)育明顯異常:背主動脈(DA)和后主靜脈(PCV)直徑變細(xì)，背部縱向血管(DLAV)到PCV距離（軀干寬度），DA到PCV間距離以及體節(jié)間血管(ISV)距離都顯著

3、變短，ISV生長的角度也明顯異常。另外，乙醇抑制了脊索旁血管（PAV）的生長，這些變化與乙醇劑量都有一定的關(guān)系。通過反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法和熒光強(qiáng)度統(tǒng)計得出，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體2(VEGFR2)，隨乙醇濃度增高表達(dá)降低。與PAV生長相關(guān)因子Netrin 1a，Unc5b的表達(dá)與乙醇濃度呈反比。進(jìn)一步Netrin 1a 過表達(dá)實驗表明該分子能部分地恢復(fù)乙醇對PAV血管的抑制作用，提示乙醇可能通過抑制Netrin 1a