絲素蛋白-骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性肽的制備和實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分絲素蛋白/骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性肽的制備及生物學(xué)活性研究
　　目的：將絲素蛋白及骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性氨基酸序列結(jié)合，制備絲素蛋白/骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性肽（SF/BMP2活性肽），并研究其促干細(xì)胞定向分化的活性。
　　方法:用固相多肽合成法制備絲素蛋白/骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性肽,以明膠海綿作為支架材料，將復(fù)合 SF/BMP2活性肽的浸出液與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）共培養(yǎng),CCK-8法觀測(cè)細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)情況；胰酶消化與

2、骨髓間充質(zhì)共培養(yǎng)2周后的細(xì)胞，行茜素紅染色及堿性磷酸酶染色（ALP）觀察促骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化的能力。
　　結(jié)果：利用固相多肽合成法成功制備絲素蛋白/骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性肽，SF/BMP2活性肽浸出液對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖與正常培養(yǎng)組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；經(jīng)茜素紅及 ALP染色染色發(fā)現(xiàn)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)活性肽誘導(dǎo)后表達(dá)成骨細(xì)胞特征。
　　結(jié)論：絲素蛋白/人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性肽對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖無(wú)影響，可以誘導(dǎo)骨髓

3、間充質(zhì)干細(xì)胞向促成骨方向分化，可以作為組織工程骨中的細(xì)胞活性因子。
　　第二部分絲素蛋白/骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性肽的異位成骨能力研究
　　目的：制備絲素蛋白/骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性肽，研究絲素蛋白/骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性肽的載藥釋放規(guī)律和大鼠大腿肌袋異位成骨活性，為此后的實(shí)驗(yàn)提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：BCA法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)SF/BMP2活性肽溶液中SF/BMP2活性肽濃度，記錄支架載藥率，計(jì)算累積釋放量。用明膠海綿作為支架材

4、料，將單純明膠海綿及SF/BMP2活性肽/明膠海綿、BMP-2/明膠海綿分別植入24只大鼠大腿肌袋，單純明膠海綿組為對(duì)照組。術(shù)后4周、6周行CT檢測(cè)，處死大鼠，切除植入材料的周?chē)M織，HE染色后行組織學(xué)觀察。
　　結(jié)果：絲素蛋白/骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性肽釋放曲線(xiàn)符合緩釋藥物規(guī)律；CT檢測(cè)異位成骨可見(jiàn)異位骨組織形成，組織形態(tài)學(xué)觀察見(jiàn)實(shí)驗(yàn)組有成骨細(xì)胞形成。
　　結(jié)論：絲素蛋白/骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性肽載藥率良好，藥物釋放具有一定的緩