絲素蛋白-骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性多肽在大鼠腰椎后外側(cè)融合中的研究與應(yīng)用.pdf

1、目的：化學合成絲素蛋白/骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性多肽（SF/BMP-2活性多肽），并研究其釋放規(guī)律和促小鼠成骨前體細胞（MC3T3-E1）的增殖、成骨分化以及在動物脊柱融合的作用。
　　方法：
　　(1)體外實驗：用固相合成法制備SF/BMP-2活性多肽，以明膠海綿作為支架，構(gòu)建成為SF/BMP-2活性多肽/明膠海綿的復(fù)合材料。應(yīng)用BCA蛋白測定法檢測不同時間點SF/BMP-2活性多肽/明膠海綿復(fù)合材料的釋放曲線。將復(fù)合材料與小

2、鼠成骨前體細胞（MC3T3-E1）共培養(yǎng)，用CCK-8試劑盒檢測細胞的增殖情況，進行堿性磷酸酶染色（ALP）及茜素紅染色觀察促MC3T3-E1細胞成骨分化的能力。
　　(2)體內(nèi)實驗：將SD大鼠隨機分為三組：明膠海綿對照組（G1），BMP-2/明膠海綿組（G2），SF/BMP-2活性多肽/明膠海綿組（G3）。將載有BMP-2和SF/BMP-2活性多肽的明膠海綿填充于大鼠腰椎4、5節(jié)段之間的后外側(cè)，動物手術(shù)操作完成1月、3月，分別用

3、手工觸診、Micro-CT和組織染色等方法對脊柱融合的效果進行評估。
　　結(jié)果：
　　(1)體外實驗：SF/BMP-2活性多肽/明膠海綿復(fù)合材料釋放曲線符合緩釋規(guī)律；MC3T3-E1細胞能夠在SF/BMP-2活性多肽浸出液中正常生長增殖；ALP染色及茜素紅染色結(jié)果顯示，MC3T3-E1表達成骨細胞的特征。
　　(2)體內(nèi)實驗：SF/BMP-2活性多肽/明膠海綿組手法觸診腰椎后外側(cè)融合，Micro-CT檢測可見腰椎后外側(cè)