2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、腎臟移植是終末期腎臟疾病最好的治療方法。隨著免疫抑制藥物廣泛使用,T細(xì)胞介導(dǎo)排斥反應(yīng)顯著降低,但是急、慢性抗體介導(dǎo)排斥反應(yīng)在腎臟移植物丟失中起著越來越重要作用。預(yù)存或術(shù)后新生抗人類白細(xì)胞抗原(Human leukocyte antigen,HLA)抗體介導(dǎo)的排斥反應(yīng)已被認(rèn)為是影響移植物長期存活的最重要因素。因此如何有效清除抗HLA抗體及抑制抗體介導(dǎo)的排斥反應(yīng)已經(jīng)成為研究和臨床治療的熱點。
  本研究通過體外合成人源化HLA-A2蛋

2、白,用其構(gòu)建預(yù)存抗HLA-A2抗體動物模型并探索有效干預(yù)措施,為臨床脫敏治療奠定基礎(chǔ)。本文共分為三部分:
  第一部分應(yīng)用原核表達(dá)系統(tǒng)制備人源化HLA-A2重組蛋白
  目的:應(yīng)用原核表達(dá)系統(tǒng)合成人源化HLA-A2胞外段蛋白。
  方法:利用PCR(Polymerase Chain Reaction, PCR)技術(shù)從THP-1細(xì)胞中擴(kuò)增HLA-A2胞外結(jié)構(gòu)域基因,并將其連接至PMD19-T載體,構(gòu)建形成PMD-19-H

3、LA-A2克隆載體,通過克隆鑒定和測序分析,利用PCR技術(shù)從PMD-19-HLA-A2中擴(kuò)增HLA-A2胞外段基因,并將其插入pCzn1載體,構(gòu)建形成pCzn1-HLA-A2表達(dá)載體,通過克隆鑒定和測序分析后,將其轉(zhuǎn)化到原核表達(dá)細(xì)胞中進(jìn)行目的蛋白表達(dá)、純化和鑒定。
  結(jié)果:經(jīng)過克隆鑒定和測序鑒定,PMD-19-HLA-A2克隆載體和pCzn1-HLA-A2表達(dá)載體構(gòu)建成功;誘導(dǎo)表達(dá)后所獲取蛋白溶液,經(jīng)過鎳柱親和層析純化后,獲得H

4、LA-A2重組蛋白,濃度約為0.49 mg/mL。純化后HLA-A2重組蛋白經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色鑒定,可見一條分子量約為34kD的特異性條帶,與目的蛋白大小相符。
  結(jié)論:應(yīng)用原核表達(dá)系統(tǒng)可成功表達(dá)人源化HLA-A2重組蛋白,為下一步建立預(yù)存抗體動物模型奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。
  第二部分應(yīng)用 HLA-A2重組蛋白建立預(yù)存 HLA-A2抗體的BALb/c小鼠模型
  目的:探討預(yù)存HLA-A2抗體小鼠模型所需免疫原劑量及免疫后小

5、鼠體內(nèi)抗體和淋巴細(xì)胞的變化,為探索治療方案奠定基礎(chǔ)。
  方法:運用不同劑量的HLA-A2重組蛋白與等體積弗氏完全佐劑混勻后行腹部皮下免疫,使用酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)檢測法和流式細(xì)胞檢測法觀察不同時間點小鼠外周血HLA-A2抗體的變化及小鼠骨髓和脾臟中淋巴細(xì)胞、CD138+漿細(xì)胞及C19+B細(xì)胞和各B細(xì)胞亞群變化。
  結(jié)果:200μg和100μg

6、免疫劑量均引起小鼠外周血抗體滴度顯著增加,但兩者之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。免疫后,小鼠脾臟中淋巴細(xì)胞、CD138+漿細(xì)胞及C19+B細(xì)胞比例逐漸升高,于第4周時達(dá)到頂峰;骨髓中淋巴細(xì)胞、CD138+漿細(xì)胞及C19+B細(xì)胞比例逐漸升高,于第2周時達(dá)到頂峰;骨髓和脾臟中分別以前/祖 B細(xì)胞及記憶性B細(xì)胞亞群變化最明顯。
  結(jié)論:100μg作為免疫劑量于4周時可以有效建立預(yù)存HLA-A2抗體BALb/c小鼠模型,并成功觀察到免疫后小鼠骨

7、髓和脾臟中淋巴細(xì)胞亞群變化規(guī)律,為下一步探索清除預(yù)存抗體奠定理論基礎(chǔ)。
  第三部分清除高致敏小鼠體內(nèi)預(yù)存HLA-A2抗體的研究
  目的:研究不同治療方法對預(yù)存HLA-A2抗體的BALb/c小鼠外周血中抗體及脾臟和骨髓中淋巴細(xì)胞的影響。
  方法:運用已構(gòu)建預(yù)存HLA-A2抗體的BALb/c小鼠模型,分別使用ELISA法和流式細(xì)胞儀檢測藥物治療后小鼠外周血中HLA-A2抗體及脾臟、骨髓中淋巴細(xì)胞亞群的變化;采用磁珠分

8、選小鼠脾臟和骨髓中CD138+漿細(xì)胞,并運用實時定量PCR(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction, Real Time PCR)技術(shù)檢測硼替佐咪治療后CD138+漿細(xì)胞的相關(guān)因子相對表達(dá)量變化。
  結(jié)果:硼替佐咪單劑量治療后,骨髓中CD19+B細(xì)胞和CD138+漿細(xì)胞顯著下降,其以CD138+漿細(xì)胞最明顯,且骨髓中前/祖B細(xì)胞也顯著降低,3天后開始緩慢恢復(fù),7天時恢復(fù)正

9、常;骨髓和脾臟中CD138+漿細(xì)胞的促凋亡因子Chop相對表達(dá)量顯著增加。硼替佐咪短期治療后,骨髓和脾臟中淋巴細(xì)胞、CD138+漿細(xì)胞及長期/短期存活漿細(xì)胞均顯著低于利妥昔單抗治療組,而CD19+B細(xì)胞高于利妥昔單抗治療組;其降低HLA-A2抗體的幅度雖強于利妥昔單抗治療組,但是仍維持較高水平。采用硼替佐咪長期連續(xù)治療后,骨髓淋巴細(xì)胞和CD138+漿細(xì)胞下降幅度大于CD19+B細(xì)胞,且HLA-A2抗體也顯著下降,均顯著低于對照組,但是治

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