牛瑟氏泰勒蟲病動物模型及間接熒光抗體試驗的建立.pdf

1、本試驗首先選擇了嚴重免疫缺陷(SCID)鼠作為實驗動物模型研究對象，按Arai等方法給SCID小鼠置換正常牛紅細胞，結果SCID鼠體內(nèi)有90％左右紅細胞被牛紅細胞所置換。給SCID小鼠人工感染牛瑟氏泰勒蟲，通過血液涂片鏡檢觀察到在人工感染第4天末梢血液中出現(xiàn)了新增殖的牛瑟氏泰勒蟲蟲體，第10～12天紅細胞染蟲率高達23％，并出現(xiàn)了與牛瑟氏泰勒蟲病相似的貧血、血紅蛋白減少等癥狀，此后在小鼠血液中牛瑟氏泰勒蟲逐漸減少。如果定期輸入正常牛紅細

2、胞，血液中蟲體可持續(xù)25～30天。 在利用SCID鼠建立了牛瑟氏泰勒蟲病動物模型的基礎上，為了克服SCID鼠的成本高、不易飼養(yǎng)管理，給試驗帶來不便。我們將昆明小白鼠主要免疫器官脾臟摘除和高劑量、連續(xù)注射地塞米松也能達到抑制昆明小白鼠免疫功能的目的，使牛瑟氏泰勒蟲能感染給昆明小白鼠。昆明小白鼠人工感染牛瑟氏泰勒蟲后的第8天，用PCR方法能檢測出特異陽性帶；第14天在其末梢血液中出現(xiàn)少量蟲體，紅細胞染蟲率為0.8～3％。注射地塞米松

3、后腹腔注入感染瑟氏泰勒蟲的牛紅細胞方法組的昆明小白鼠紅細胞內(nèi)蟲體出現(xiàn)時間和紅細胞染蟲率要比摘除脾臟組小白鼠的早和高。 牛瑟氏泰勒蟲病動物模型的建立，解決了抗原來源不足等問題。當SCID鼠紅細胞染蟲率達到15％時，昆明小白鼠紅細胞染蟲率達到3％時，自心臟采集抗凝血，用pH7.2PBS洗滌、懸浮后，加于12穴免疫熒光載玻片，制備成免疫熒光試驗抗原片，建立了牛瑟氏泰勒蟲病間接熒光抗體試驗。結果表明，該法具有特異性強、敏感性高、操作簡單