牛瑟氏泰勒蟲(chóng)18S rRNA基因的克隆及PCR診斷方法的建立.pdf

1、牛瑟氏泰勒蟲(chóng)病是由泰勒科、泰勒屬的瑟氏泰勒蟲(chóng)（Theileria sergenti）寄生于牛紅細(xì)胞和淋巴細(xì)胞而引起的一種血液原蟲(chóng)病。近些年，瑟氏泰勒蟲(chóng)病的發(fā)生呈上升趨勢(shì)，給相關(guān)國(guó)家的畜牧業(yè)帶來(lái)了較大的經(jīng)濟(jì)損失，引起了國(guó)內(nèi)外獸醫(yī)界的廣泛關(guān)注。因此有必要建立一種快速、敏感、特異診斷方法，以便進(jìn)行牛瑟氏泰勒蟲(chóng)病的早期診斷和預(yù)防。
　　本試驗(yàn)根據(jù)GenBank中報(bào)道的牛瑟氏泰勒蟲(chóng)18S rRNA基因序列，設(shè)計(jì)了兩對(duì)特異性引物，擴(kuò)增兩條特異

2、性基因片斷，再去除重復(fù)區(qū)，經(jīng)過(guò)拼接得到牛瑟氏泰勒蟲(chóng)18S rRNA基因全序列，進(jìn)行核苷酸序列分析及同源性比較。再以牛瑟氏泰勒蟲(chóng)18S rRNA基因?yàn)榘谢颍O(shè)計(jì)特異性引物建立PCR診斷方法，并進(jìn)行應(yīng)用試驗(yàn)。
　　結(jié)果表明，PCR擴(kuò)增出長(zhǎng)為1173 bp和1440 bp兩條特異性基因片斷，去除重復(fù)區(qū)拼接得到全長(zhǎng)為1744 bp的牛瑟氏泰勒蟲(chóng)18S rRNA基因序列。同源性比較結(jié)果表明，牛瑟氏泰勒蟲(chóng)(Theileria sergent

3、i)與水牛泰勒蟲(chóng)(Theileria buffeli)同源性最高，為99％，與突變泰勒蟲(chóng)同源性最低，為95%。建立的PCR診斷方法不與新孢子蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)、羊泰勒蟲(chóng)發(fā)生交叉反應(yīng)，最高敏感度DNA為5.3 fg/μL。對(duì)50份樣本DNA進(jìn)行檢測(cè)，本方法陽(yáng)性檢出率(64.0%)高于金春梅方法陽(yáng)性檢出率(58%)。
　　本研究為我國(guó)瑟氏泰勒蟲(chóng)分子分類(lèi)學(xué)、遺傳學(xué)以及診斷工作奠定理論基礎(chǔ)，為牛瑟氏泰勒蟲(chóng)病的診斷、流行病學(xué)調(diào)查提供特異、快速、靈敏