羊痘病毒P32基因的克隆、表達(dá)及PCR診斷方法建立.pdf

1、Y 7 7 4 8 6 2舟類號(hào)密級(jí)單位代碼：1 0 0 1 9學(xué) 號(hào)：S 0 2 3 1 9弋蛾寰- t 文嗇’碩士學(xué)位論文羊痘病毒P 3 2 基因的克隆、表達(dá)及P O R 診斷方法建立C l o n i n g a n d E x p r e s s i o n o f t h eP 3 2 G e n e o f C a p r i p o x v i r u sa n d E s t a b l i s h i n gP C R

2、 D i a g n o s t i c M e t h o d研 究指 導(dǎo) 教 師： 醫(yī)酉圭』直級(jí)盞醫(yī)婭合作指導(dǎo)教師： 旦壺苤嬰窒雖：申請(qǐng)學(xué)位門(mén)類級(jí)別： 塞堂亟±專 業(yè) 名 稱： 亟陵整醫(yī)堂研 究 方 向： 動(dòng)物疫瘟途逝所 在 學(xué) 院： 動(dòng)物匡堂瞳2 0 0 5 年6 月A b s t r a c tc a —p o x ( S h e e p p o xa n dg o a t p o x ) ，c a u s e db

3、y c a p r i p o x v i r u s ，i sa n a c u t ef e v e d s h a n d c o n t a g i o u sd i s e a s ei ns h e e p o rg o a t ．C a p r i p o xi sc l a s s f i e da s g r o u pA d i s e a s e sb y O f f i c eI n t e r n a t i

4、o n a ld e sE p i z o o t i e s( O I E ) a n dg r o u p f i r s t d i s e a s e si n C h i n a ．P 3 2p r o t e i ni so n e o ft h ev i r u ss t r u c t u r e p r o t e i n s ·I ts t a n d so u t o l lt h e v i e s e

5、 n v e l o p es u r f a c ea n d c o n t a i n s n e u t r a l i z e da n t i g e ne p i t o p e ．T h ev i r a la t t a c h m e n tp r o t e i ng e n ei ss p e c i f i cf o rc a p r i p o x v i r u s ．T h eP 3 2 g e n eo

6、 fc a p r i ‘p o x v i r u sw e ∞a m p l i f i e d b yP e R ，T h ep r o d u c to fP C Rw a s c l o n e dt o t h 8p l a s m i dp G E M - T - E a s y ．T h e nt h eP 3 2g e n e w a sd i s p a r t e d t o t h r e ep a r t s

7、．T h r e ep a n so fP 3 2g e n ew e r ei n s e r t e di n t ot h ee x p r e s s e dp l a s m i d sp G E X - 4 T - 1 ，w h i c h w e r ei d e n t i f i e db y P C Ra n d r e s t r i c t i o ne n z y m ea n a l y s i s ．T h

8、 e I e c o m b i n a n t p l a s m i d s o f p G E X - 4 T - 1 - N 2 ／3 、p G E X - 4 T - 1 - N 1 ／3 、P G E X - 4 T ．1 - Mw e r es u c c e s s f u l l vc o n s t m c t e d ．T h r e ep a n so fP 3 2 g e n ew e r ee x p r e

9、 s s e di nE ．c o l ii n d u c e db yI P T Gi n t h ef o r mo f i n c l u s i o n b o d i e d ．T h e m o l e c u l a rw e i g h 慷o f e x p r e s s e d p r o t e i n a l e 5 2 K D a ，3 8 K D a a n d 4 0 K D af e s P C c t

10、 i v e l y ．T h e e x p r e s s e dp r o t e i n s w e r e p u r i f i e db ye l e c t r o d i a l y s i s a n d d e t e c t e dw i t h E L I S A ·T h ef e s u i t so fE L I S A d e m o n s t r a t e dt h a t t h et

11、 h r e ee x p r e s s e dp r o t e i n ss h a r e dr e a c t i o nw i t hs t a n d a r dp o s i t i v es e r u m o f c a p r i p o x ．A c c o r d i n g t ot h e a t t a c h m e n tg e n es e q u e n c e so f t h eC a p r

12、 i p o x v i r u s ．p r i m e r sw e r ed e s i g n e d ·A1 9 2 b pl a r g e tg e n ew a sa m p l i f i e db yP C R ．T h e t a r g e tg e n ew a s p a r to ft h ea t t a c h m e n tg e n e o fc a p f i p o x v i r u

13、 sb ys e a u e n c e a n a l y s i s ．B a s e d o n t h e o p t i m i z e d e x p e r i m e n t s o f P C R ，t h es p e c i f i t y a n d s e n t i t i v i t y o f t h i sd i a g o o s t i cm e t h o d w e r e t e s t e