表達(dá)裂谷熱病毒糖蛋白重組山羊痘病毒的研究.pdf

1、裂谷熱(RftValleyFever，RVF)是反芻動(dòng)物和人共患的一種烈性傳染病，可通過(guò)蟲(chóng)媒(庫(kù)蚊等)及直接接觸等途徑傳播，具有傳染性強(qiáng)、致死率高、易感動(dòng)物廣泛等特性。RVF每次流行均造成巨大的社會(huì)經(jīng)濟(jì)損失和公共衛(wèi)生危機(jī)。國(guó)際獸醫(yī)局(OIE)已將RVF列為A類傳染病，也是國(guó)際上重要的生物武器研究對(duì)象及生物反恐防范對(duì)象。RVF主要流行于非洲，2000年前后蔓延至中東及阿拉伯半島。近年，南亞地區(qū)也有跡象表明存在該病毒的流行。隨著全球化貿(mào)易、

2、人員交往快速發(fā)展及全球氣候變暖趨勢(shì)的加速，我國(guó)面臨RVF等新發(fā)傳染病的威脅也越來(lái)越嚴(yán)重，急需開(kāi)展疫苗、診斷監(jiān)察技術(shù)等相關(guān)防控技術(shù)的研究。 裂谷熱病毒(RiftValleyFeverVirus，RVFV)為布尼安病毒科(Bunyaviridae)的Phlebovirus屬成員，僅一個(gè)血清型。囊膜糖蛋白G是RVFV的主要結(jié)構(gòu)蛋白及保護(hù)性免疫原，由基因組M節(jié)段編碼，翻譯后裂解為GN和GC兩個(gè)亞單位。 山羊痘病毒(Goatpox

3、virus，GPV)宿主范圍明確，主要限于山羊和牛等反芻獸。GPV基因組容量大，遺傳性穩(wěn)定，復(fù)制非必需區(qū)明確，可耐受大片段外源基因的插入、重組和表達(dá)，作為重組病毒載體疫苗不影響流行病血清學(xué)監(jiān)測(cè)。 本研究首先以我國(guó)自行培養(yǎng)并得到廣泛應(yīng)用的山羊痘病毒(GPV)疫苗株為載體，以復(fù)制非必需區(qū)TK基因?yàn)椴迦氚悬c(diǎn)，通過(guò)同源重組，構(gòu)建了痘病毒晚期啟動(dòng)子p11驅(qū)動(dòng)、內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(ires)介導(dǎo)的黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(gpt)和綠熒光

4、蛋白基因(gfp)串聯(lián)表達(dá)的重組病毒rGPV-gpt-ires-egfp。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步構(gòu)建痘病毒早晚期啟動(dòng)子p7.5驅(qū)動(dòng)RVFV保護(hù)性抗原G基因片段重組病毒rGPV-gie-rvfv-g(n+c)，利用霉酚酸(Mycophenoiicacid,MPA)藥物篩選后，經(jīng)PCR、Western-blot和IFA(間接免疫熒光)方法證實(shí)G蛋白在重組病毒中穩(wěn)定表達(dá)，并被有效裂解為GN和GC兩個(gè)亞單位，重組病毒具有良好細(xì)胞生長(zhǎng)特性。本研究為R