山羊痘病毒N1L基因缺失重組毒株的構(gòu)建及其生物特性研究.pdf

1、本研究以GTPV基因組為模板，以N1L基因側(cè)翼序列為同源重組左右臂構(gòu)建了表達(dá)綠色熒光蛋白及黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的轉(zhuǎn)移載體質(zhì)粒pLR-EGFP-gpt。將pLR-EGFP-gpt與GTPV共轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞（非洲綠猴腎細(xì)胞）并在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生同源重組，通過(guò)加壓篩選純化出缺失N1L基因的重組病毒GTPV△N1L。采用相同方法在pLR-EGFP-gpt中反向插入N1L基因表達(dá)盒構(gòu)建了N1基因缺失后再拯救的重組轉(zhuǎn)移載體pLR-EGFP-gp

2、t-N1Lrev，并與GTPV共轉(zhuǎn)染后篩選出恢復(fù)突變的重組病毒GTPV N1Lrev。遺傳穩(wěn)定性和生物學(xué)特性鑒定證實(shí)，GTPV△N1L能在至少10代內(nèi)穩(wěn)定遺傳，且在細(xì)胞病變和生長(zhǎng)性能等方面與親本毒株相比均未發(fā)生顯著改變，但是相同毒價(jià)的GTPV△N1L與親本毒株在病毒拷貝數(shù)上相差30倍，初步證實(shí)缺失N1L基因并沒(méi)有對(duì)病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中復(fù)制產(chǎn)生太大影響，但是使病毒毒力有一定程度的降低，表明N1L可能為病毒毒力因子之一。
　　擴(kuò)增GTPV