表達(dá)狂犬病病毒G蛋白重組犬瘟熱病毒Snyder Hill株的研究.pdf

1、狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus，RV)引起的一種致死性人畜共患傳染病，能引起人和哺乳動(dòng)物的急性、漸進(jìn)性致死性腦膜腦炎。全球每年約有59，000人以及數(shù)十萬(wàn)的動(dòng)物死于狂犬病，其中95％以上的死亡病例發(fā)生在亞洲和非洲，99％以上的人狂犬病死亡病例是由感染RV的犬舔舐或咬傷引起。減少和控制人感染狂犬病病例數(shù)最有效的方法是提高犬的免疫覆蓋率，當(dāng)犬的免疫覆蓋率達(dá)到70％便可從源頭上控制、消除狂犬病。目前，狂犬病弱毒

2、活疫苗已禁止生產(chǎn)和使用;滅活疫苗雖安全有效，但成本高昂。因此，研制一種高效、安全、價(jià)格低廉的動(dòng)物狂犬病疫苗仍具有較高的應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。
　　犬瘟熱(Canine distemper,CD)是由犬瘟熱病毒(Canine distemper virus，CDV)引起的一種在犬科、鼬科、浣熊科以及其它肉食動(dòng)物之間廣泛傳播的一種病毒性傳染病。該病呈季節(jié)性流行，且宿主范圍不斷擴(kuò)大，呈世界性分布，嚴(yán)重威脅畜牧養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。CD弱毒疫苗

3、能有效預(yù)防和控制該病在肉食動(dòng)物之間的傳播，應(yīng)用廣泛。反向遺傳技術(shù)的發(fā)展和成熟使CDV作為疫苗載體成為可能。CDV也具備作為疫苗載體應(yīng)用的潛力，以CDV為載體構(gòu)建CDV/RV二聯(lián)活載體疫苗可實(shí)現(xiàn)一苗兩防、經(jīng)濟(jì)高效的提高狂犬病免疫覆蓋率。
　　本研究以本實(shí)驗(yàn)室分離的CDV Snyder Hill疫苗株為親本毒株，建立其反向遺傳操作系統(tǒng)，拯救成功的病毒rCDV和野生型CDV Snyder Hill在Vero細(xì)胞上保持相似的生長(zhǎng)特性，在感

4、染后120h病毒滴度達(dá)到最高1×106.1TCID50/mL。為探索CDV Snyder Hill株作為活病毒載體表達(dá)外源基因的潛力，在CDV基因組P、M之間插入外源基因EGFP構(gòu)建重組病毒rCDV-EGFP，經(jīng)生長(zhǎng)曲線和遺傳穩(wěn)定性檢測(cè)，重組病毒與親本株rCDV的生長(zhǎng)特性相似，且重組病毒在Vero細(xì)胞上連續(xù)傳18代仍能高效、穩(wěn)定表達(dá)EGFP，具有良好的遺傳穩(wěn)定性。在此基礎(chǔ)之上，構(gòu)建了重組病毒rCDV-RVG，經(jīng)IFA、Western B

5、loting鑒定分析，RVG蛋白在重組病毒感染的細(xì)胞中正確、穩(wěn)定表達(dá)，拯救的重組病毒與親本株病毒在Vero細(xì)胞上具有相似的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線，病毒滴度最高可達(dá)1×105.7TCID50/mL。犬免疫實(shí)驗(yàn)證明，重組病毒rCDV-RVG以105.5TCID50/mL/只劑量免疫犬3w后，犬體內(nèi)均可產(chǎn)生特異性CDV、RV中和抗體，其中RV中和抗體平均值為21.71IU/mL，遠(yuǎn)高于RV中和抗體保護(hù)臨界值0.5IU/mL。
　　本研究結(jié)果表明