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1、石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文犬瘟熱病毒石河子株的初步分離及核衣殼蛋白基因原核表達(dá)姓名：楊井泉申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：薄新文201106IIAbstractCaninedistemperisacaninedistempervirus(CaninedistempervirusCDV)infectioncausedbyanacutefebrilehighlycontagiousdiseasestherefeitiscurrent
2、lyoneofthemostdamaginganimaldiseasesonthedogindustrythefurindustryanimalbreedingwildlifetrade.InthisstudyaRTnestedPCRassayfdetectingCaninedistempervirus(CDV)wasestablishedusing2pairsofprimers.Theprimersweredesignedusingn
3、ucleocapsidprotein(NP)geneinfmationofCDVOnderstepotstraininGenBank.TheassayamplifiedonlyaNPgenefromCDV：butnotfromothervirussuchasRabiesvirus(RV)Canineparvovirus(CPV)Verocell.Serial10folddilutionsof106TCID50CDV3strainwere
4、usedfbothPCRRTnestedPCR.ThelowerdetectionlimitfCDVRNA106103dilutionsftheRT–nestedPCRthetraditionsRTPCRrespectively.TheRTnestedPCRmethodwassuccessfullyusedtodetectfsuspectedCDVinfectioninclinicalsamplesfromShihezi，thuscou
5、ldbeusefulftheclinicalsamplesfromdifferenttissues.ItaslocanbeusedfaquickdiagnosisofCDtheepidemiologicalinvestigation.InthisstudythesupernatantofthetissuefromthedogsinfectedCDVwasinvestigatedonVerothecytopathicwasappeared
6、after5generationsthroughblindpassages.RTnestedPCRwasusedtodetectthesupernatantofcelllysisharvestedfrozen.TheCytopathicwerealongstretchinthecellnumerousroundcellsshrinkageofcellularmembranecellaggregatedattachedtothesurfa
7、ceofothercells.ThespecificbofPCRproductwasappearedbyelectrophesis.TheresultsshowedthatThespecificbofPCRproductistheCDVsequencespecificnucleicacidsequences.CompoundwiththesupernatantofthetissuefromthedogsinfectedCDVthecoi
8、ncidenceratewas100%indicatingthatthesupernatantofthetissuefromthedogsdidnotresultinDNAmutationstherefethesupernatantofCDVShiheziinfectedfrozencellwasharvested.Inthisstudytheprimersofthefulllengthnucleocapsidproteinthehem
9、agglutiningenesequencesofCDVShiheziOnderstepotattenuatedstraininGenBankweredesigenedtoamplifytheNPgeneofCDVShihezistrainanalysisthesequence.TheresultsshowedthattheNPgeneofCDVShihezistrainwassuccessfullyclonedtheproteinen
10、codedepitopeswereanalyzed.Theresultsshowthatamplificationofthenucleocapsidproteingenewas1688bpacompleteopenreadingframe(F)was1572bpencoding523aa.NucleicacidsequencehomologyphylogeicanalysisshowedthatCDVstrainsHM596313Shi
11、hezistrainshared100%identityattheaminoacidlevelonlytwobasedifferencesofthenucleicacidsequences.Hemagglutiningenewas607bpencoding202aasharedwithTNstrain(AY390347)aminoacidhomologywas98.02%withJapanKDK1strain(AB025271)was9
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