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文檔簡(jiǎn)介
1、羊痘病毒(Capripoxvirus,CPV)能分別引起山羊痘、綿羊痘和牛的結(jié)節(jié)性疹塊病。羊痘(綿羊痘和山羊痘)被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為A類重大傳染病,我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疾病。羊痘病毒P32蛋白是CPV具有很好保守性的主要結(jié)構(gòu)蛋白,且含有主要抗原決定簇。 本研究采用PCR技術(shù)擴(kuò)增出CPV P32基因,將其克隆至pMD18-T載體。經(jīng)酶切鑒定、PCR分析證實(shí)獲得了與預(yù)期片段大小一致的P32基因,將其測(cè)序分析后與GenBa
2、nk中AF124517株相比較,同源性為98.2﹪,與AY159333株相比較,同源性為99.4﹪。用限制性內(nèi)切酶EcoR I、Not I將P32基因從重組克隆載體pMD18-P32中切下后與相應(yīng)限制性內(nèi)切酶酶切過(guò)的畢赤酵母分泌型表達(dá)載體pPIC9K相連接,構(gòu)建了重組表達(dá)載體pPIC9K-P32。將重組表達(dá)載體pPIC9K-P32電轉(zhuǎn)化畢赤酵母菌種GS115,將P32基因亞克隆至pPIC9K,經(jīng)G418抗性梯度篩選,獲得多拷貝重組菌株。
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