木瓜凝乳蛋白酶基因克隆及其在畢赤酵母中表達(dá)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究利用基因重組技術(shù),將木瓜凝乳蛋白酶基因整合到畢赤酵母基因組中,構(gòu)建了能夠分泌表達(dá)木瓜凝乳蛋白酶的基因工程菌.首先從木瓜組織中分離總RNA,然后在反轉(zhuǎn)錄酶作用下以poly(dT)為引物將總RNA中mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA.再根據(jù)已知木瓜凝乳蛋白酶基因序列以及畢赤酵母表達(dá)載體pPIC9K多克隆位點(diǎn)序列組成設(shè)計(jì)了一對特異性引物.最后以反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板,通過優(yōu)化PCR反應(yīng)條件,克隆得到與目的基因大小一樣的片段.為了表達(dá)與天然蛋白大小一致的

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